分光光度法测定肥料中壳聚糖的含量.doc

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1、分光光度法测定肥料中壳聚糖的含量1方法原理肥料中壳聚糖经水解后生成氨基葡萄糖，与乙酰丙酮和对二甲基苯甲醛生成红色化合物，在525nm波长处用分光光度计测定。2试剂与材料盐酸溶液：1+1氢氧化钠溶液：200g/L碳酸钠溶液：c（1/2Na2CO3）=0.5mol/L乙酰丙酮溶液：取乙酸丙酮2.0ml，加入碳酸钠溶液至50ml，置冰箱中备用，应于使用前一日配置。盐酸氨基葡萄糖标准溶液：ρ（盐酸氨基葡萄糖）=0.100mg/ml。称取105℃干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖0.5g（准确至0.0002g），置500ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，移取10.00nl，至100ml容量瓶中，加水

2、至刻度，摇匀。无醛乙醇对二甲基苯甲醛溶液：称取对二甲基苯甲醛0.8g，加无醛乙醇15ml及盐酸溶液15ml，摇匀。3仪器设备一般实验室仪器和设备分析天平分光光度计4分析步骤4.1试验溶液的制备称取试样1g（准确至0.0002g）于100ml容量瓶中，加入5ml盐酸溶液，加塞，摇匀，于100℃水解6h，冷却，用氢氧化钠溶液中和至中性，用水稀释至刻度，摇匀，备用4.2求标准曲线方程式（绘制标准曲线）移取盐酸氨基葡萄糖标准溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml分别置于具塞试管中，用水稀释至5.00ml，各加入乙酰丙酮溶液1.00ml，摇匀，于100℃水浴中（1min后

3、加盖）静置25min，取出，用冰水迅速冷却后，加入无醛乙醇3.00ml，于60℃水浴中静置10min后，再加入对二氨基苯甲醛溶液1.00ml，用力振摇后，由60℃水浴中静置1h，取出立即用冷水冷却至室温。在波长525nm处，用1cm比色皿，以试剂空白为参比液，测其吸光值。根据测得的数据求关于吸光值和氨基酸葡萄糖质量的标准曲线方程式（绘制标准曲线）。4.3试样的测定移取试验溶液（4.1）1.00ml置于具塞试管中，按4.2中“用水稀释至5.00ml”，及其后面的步骤进行。将测得的吸光值带入标准曲线方程，求得对应氨基葡萄糖的质量。5、分析结果的表达以质量分数表示的壳聚糖（以氨基酸葡萄糖计）的质

4、量分数式中，m1------------是求得的试样盐酸氨基酸葡萄糖的质量，单位mgm2-------------------试样的质量，单位g0.8309------盐酸氨基酸葡萄糖折算为氨基酸葡萄糖的系数。