从固定液保存的刺参样品中提取基因组 DNA 的改进方法.pdf

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1、《河北渔业~2014年第8期(总第248期)o研究与探讨DOI：10．3969／j．issn．1004—6755．2014．08．003从固定液保存的刺参样品中提取基因组DNA的改进方法王祖哲，王利，顾晨雷，马普，王秀利(大连海洋大学水产与生命学院，辽宁大连116023)刺参(Apostichopusjaponicus)分类学上隶固定液中带回实验室。常规的酚一氯仿抽提法虽属于棘皮动物门、游走亚门、海参纲、檐手目、刺参然适用于各种动物组织DNA的提取，简单易行，科，是重要的经济海参物种_1]。刺参含有丰富的一般实验室即可操作，但由于刺参含有丰富的黏蛋

2、白质、酸性黏多糖、维生素、氨基酸、海参皂苷以多糖和蛋白质[4]，所以该方法应用于刺参DNA及多种微量元素和生理活性物质，具有很高的营提取时效果并不理想。本研究优化与改进了酚一养、保健和药用价值。其中以产于我国辽宁、山东氯仿抽提法对适应7o％乙醇固定保存的刺参组沿海的刺参营养、药用价值最高。随着人们生活织样品中基因组DNA的提取，为获得高质量刺水平的提高，刺参市场需求量显著增加。20世纪参基因组DNA提供方法保障。8o年代以来，随着海洋经济快速发展，我国刺参1材料及方法增养殖随之迅猛发展，已经形成了产业化。据不完全统计，我国刺参产量产值每三至五年翻一

3、番。1．1样品采集目前，刺参的年产量已接近2O万吨，产值达到实验所用刺参取自大连某养殖场，用7O乙300亿元以上，刺参已经成为我国水产业单种产醇同定刺参体壁后带回实验室于一2o℃保存值最高的经济物种之一。备用。随着刺参养殖产业的发展，必须加强刺参生1．2常规的酚一氯仿抽提法提取刺参基因物学特性、遗传多样性、功能基因的开发与利用等组DNA等方面的研究，才能科学开展刺参新品种的培育常规酚一氯仿抽提法见参考文献j。与健康养殖。在科研工作中，以PCR技术为核心1．2．1样品处理取保存在7O乙醇中的刺参的分子标记技术如限制性片段长度多态性体壁样品约0．2～0

4、．4g，用滤纸将酒精尽可能地(RFIP)、扩增片段长度多态性(AFIP)、微卫星吸干，放入灭菌的1．5mL离心管，用剪刀剪碎。(SSR)、单核苷酸多态性(SNPs)等遗传信息的分1．2．2水浴向1．5mI离心管中加入600I析在水产动物遗传育种、遗传多样性研究等方面DNA提取液(10mmol／LTris—C1，0．1mol／l已经得到广泛应用。为获得高质量的刺参基因组EDTA，0．5SDS)和蛋白酶K(20mg／mI)至终DNA，冯志纲等(2008)和孙孝德等(2010)进行了浓度100~g／mI后充分混匀，放入恒温55℃水刺参基因组DNA提取方法

5、的探讨，但他们都是浴锅中消化，水浴时每隔15rain翻转一次，直到采用活体刺参即时采样，即时提取]。而在实消化完全。际科研工作中，科研工作者往往需要到刺参养殖1．2．3萃取将溶液冷却至室温，①加入等体积场进行采样，通过将刺参样品保存在7O的乙醇的用0．1mol／ITris-CI(pH8．O)平衡过的苯酚。基金项目：大连市海洋与渔业局科研项目(990564)和大连市水产产业技术创新联合会科研项目(201400486)作者简介：王祖哲(1988一)，男，硕士研究生，研究方向：水产动物基因工程。E—mail：1665l957@qq．corn通讯作者：王秀

6、利，男，博士，教授，研究方向：水产动物基因工程。E—mail：xiuliwang417@sina．com～8一