RNA干涉家蚕细胞Ago蛋白家族基因的表达研究.pdf

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1、河南农业科学，2012，41(9)：148—151，157JournalofHenanAgriculturalSciencesRNA干涉家蚕细胞Ago蛋白家族基因的表达研究陈敏。，李丹丹，乔惠丽，卢楠，文祯中。，阚云超(1．河南大学生命科学学院，河南开封475000；2．南阳师范学院伏牛山昆虫生物学重点实验室，河南南阳473061：3．平顶山学院，河南平顶山467000)摘要：分别构建RNAi(RNAinterference，RNAi)载体干扰家蚕细胞BraN中Argonautel(Ago1)和Argonaute2(Ago2)基因

2、的表达。首先利用PFBDM和pBacEA3一EOFPafm]裁体构建Ago1和Ago2基因的RNA干涉载体，通过转染家蚕细胞发现，Agol和Ago2基因表达明显下降。并观察细胞形态发现，转染RNAi载体96l后。家蚕BraN细胞逐渐失去正常的梭形状态，体积变大，形态变圆。该研究为进一步研究家蚕中smallRNA的产生及作用机制提供了较好的基础。关键词：RNA干涉；Ago蛋白；基因表达；家蚕中图分类号：$881文献标识码：A文章编号：1004—3268(2012)09一O148一O5RNAInterferenceontheAgoGe

3、nesinSilkworm(Bombyxori)CHENMin’，LIDan—dan。，QIAOHui—li。，IUNan。，WENZhen—zhong。．KANYun—chao(1．CollegeofLifeScience，HenanUniversity，Kaife,lg475000，China；2．HenanKeyLaboratoryofFuniushanInsectBiology，NanyangNormalUniversity，Nanyang473061，China；3．PingdingshanUniversity，Ping

4、dingshan467000，China)Abstract：TosilencethegeneexpressionofArgonautel(Ago1)andArgonaute2(Ago2)insilk—wormBmNcells，theRNAinterference(RNAi)vectorswereconstructedandtransfectedintoBraNcells．TheresultsshowedthattheexpressionsofAgo1andAgo2weredecreasedandtheceilsturnedroun

5、derandbiggerat96bpost—transfection．Keywords：RNAi；Agoprotein；geneexpression；Bombyxmori基因沉默现象在植物和动物中普遍存在．主要以下2种途径中：microRNA介导的基因沉默和发生在2种水平上，一种是由于DNA甲基化、组蛋siRNA介导的基因沉默。在前一种途径中，miRNA白乙酰基化以及位置效应等引起的转录水平上的基与蛋白Agol结合形成RNA诱导沉默复合体因沉默(tran—scriptionalgenesilencing．TGS)；另一(RISC)

6、，调控靶标基因的表达。siRNA在后一种途种是转录后基因沉默(post—transcripti0nalgenesi—径中主要通过与Ago2结合形成RISC，来切割mR—lencing，PTGS)，即在基因转录后，通过对靶标NA，调控靶标基因的表达。有文献报道，一种新的RNA进行特异性的降解而使基因失活]。Ago蛋基因调控方式是由Piwi—interactingRNA(piR—NA)引起的，果蝇中的Piwi蛋白通过与piRNA作白家族主要在转录后的基因沉默中发挥重要作用。用，抑制移动遗传因子，从而保持胚胎基因组的稳定在对果蝇的研究中

7、发现。，Ago蛋白主要参与到收稿日期：2012一O3—19基金项目：国家自然科学基金项目(31172l58，3l100938)作者简介：陈敏(1985一)，女，河南商丘人，在读硕七研究生，研究方向：家蚕发育调控机制。E—mail：aa913568@yahoo．corn．cn*通讯作者：阚云超(1974～)，男，河南南阳人，副教授，硕士生导师，主要从事玉米和家蚕发育机制的研究。E—mail：yckanl9@hotmail．corn第9期陈敏等：RNA干涉家蚕细胞Ago蛋白家族基因的表达研究149性，但具体的调控机制还不清楚。启动活性

8、l_1。)；从家蚕cDNA中克隆Ago1(GenBank：家蚕(Bombyxmori)是人类最早驯化的动物之AB332314．1)和Ago2(GenBank：AB206986．2)CDS一，具有重要的经济价值。作为鳞翅目昆虫的模式的一段，长度分别为