嗜酸乳杆菌表面锚定展示H5N1亚型禽流感病毒血凝素HA1蛋白的研究.pdf

《嗜酸乳杆菌表面锚定展示H5N1亚型禽流感病毒血凝素HA1蛋白的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第36卷第8期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．82014年8月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineAug．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．08．03嗜酸乳杆菌表面锚定展示H5N1亚型禽流感病毒血凝素HA1蛋白的研究高明，崔红玉，王笑梅，王云峰(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为研究乳酸茵载体细胞表面锚定结合展示外源蛋白，本研究将禽流感病毒(AIV)H5N1亚型血凝素HAl

2、基因克隆于pET．28a载体中，同时PCR扩增编码S．层蛋白的锚定区域基因Slap—C，并插入HA1基因下游构建重组表达质粒pET．HA1．Slap，转化于E．coliBL21中进行HA1．Slap融合蛋白的表达，SDS．PAGE检测显示表达的HA1．Slap主要以包涵体形式存在。融合蛋白经镍柱纯化、透析复性，与氯化锂处理的嗜酸乳杆茵混合孵育，SDS．PAGE和间接免疫荧光检测表明HA1．Slap锚定结合并展示于嗜酸乳杆菌细胞壁表面，并且具有良好的稳定性。本研究结果证明了嗜酸乳杆菌细胞壁表面展示AIV的HA1抗原蛋白的可行性

3、，为新型乳酸茵载体黏膜免疫疫苗的研究奠定基础。关键词：嗜酸乳杆菌；S．层蛋白锚定展示；HA1蛋白中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)08．0593．04Lactobacillusacidophilussurfacedisplayrecombinanthemagglutinin1ofavianinfluenzavirus(H5N1)GAOMing，CUIHong—yu，WANGXiao-mei，WANGYun-feng(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBi

4、otechnology，HarbinVeterinaryResearchInstituteChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Inthepresentstudy，theS-layerproteinsurfacedisplaysystemwasusedtotestthepossibilityofdisplayingH5N1avianinfluenzavirushemagglutininprotein1(HA1)onLactobacil

5、lusacidophilussurface．ThehemagglutininHA1wasfusedtothecellwall·bindingproteinregionoftheS-layerprotein，andtherecombinantproteinwassuccessfullyproducedinEscherichiacoli．ItwaspurifiedusingaHistagaffinitycolumnandrefold，then，mixedwithacultureofL．acidophilus．SDS—PAGEan

6、dimmunofluorescenceassayshowedthebindingoftherecombinantHA1一Slapproteinonthesurfaceofthebacterialcells．ThesystemdemonstratedtheutilizationoftheL．acidophilusasamucosalvaccinedeliveryvehicletosurfacedisplaytheantigenicproteinsofavianinfluenzavirus．Keywords：Lactobacil

7、lusacidophilus；S-layerproteinsurfacedisplaysystem；hemagglutininprotein1(HA1)*Correspondingauthor收稿日期：2014．02．17基金项目：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室自主研究课题(SKLVBP201310)作者简介：高明(1988一)，男，河北秦皇岛人，硕士研究生，主要从事兽医微生物与分子生物学研究．通信作者：E．mail：yfwang@hvri．ac．ca594中国预防兽医学报2014往嗜酸乳杆菌(La

8、ctobacillusacidophilus)是一种具物Slap．-F／R(表1)扩增Slap—C基因片段。有益生作用的乳酸菌，是人体和动物肠道中的重要利用蛋白质数据库UniProtKB检索H5N1亚型微生物，其对酸和胆盐有较强的抵抗力，是一种理高致病性AIVA／goose／Guangdo