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《h5n1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达第21卷1期2006年1月中国病毒学V1RoLoGlCAS1N1CA2l(1):43.46January2006H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达宋建领,张富强,王金萍,胡媛媛(厶南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224)CloningandExpressionofNeuraminidaseGeneofH5N1SubtypeAvianInfluenzaVirusSONGJian.1ing,ZHANGFu,qiang,WANGJun.ping,H
2、UYuan.yuan(YunnanTropicalandSubtropicalAnimalVirusDiseasesLaboratory,Kunming650224,ChinaJAbstract:Apairofcloneprimersweredesignedandsynthesizedbasedonneuraminidase(NA)genesequencesofknownAvianinfluenzavirusH5Nlsubtypes.NAgenewereamplifiedfromtotalRNA.whichhadbeen
3、extractedfromallantoicfluidofH5N1subtypevirusinoculatedembryo.byreversetranscriptase—polymerasechainreactionusinghighproofreadingpolymerase(Pyobest"DNAPolymerase).andexpressedusingInvitrogenchampionpETdirectionalToP0expressionsystem.53.8kDarecombinantNAfusionwith
4、polyhistidine(6xHis1taginN.terminalwasexpressedandpurified.Itsimmunoreactivityandimmunogenicityhadbeenanalyzed.TheresultsshowedtherecombinantNAcouldnotonlybindtoantiserumagainstH5N1subtypeviruswithspecificitybutalsoelicitspecificantibodyinimmunizinganima1.andposs
5、essedgoodantigenicity.Keywords:Avianinfluenzavirus;H5N1subtype;Neuraminidase;Expression摘要:根据已知H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基(na)序列设计,合成克隆引物.自H5N1亚型病毒感染的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestT~DNAPolymerase)扩增na基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionMpETdirectionalTOPOexpressionsystem)进
6、行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氮酸标签的重组神经氮酸酶,分子量约53.8kDa.分析重组NA的免疫反应性和免疫原性,结果表明:重组NA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,且其免异动物后能诱导机体产生特异性抗体,具有良好的抗原性.关键词:禽流感病毒;H5N1亚型:神经氨酸酶:表达中图分类号:$855.3文献标识码:A文章编号:1003.5153(2006)01-0038.05禽流感(Avianinfluenza,AIorbirdflu)又名欧洲鸡瘟,真性鸡瘟,是由A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合征….l
7、997,1999,2004.2005年中国香港,泰国,越南暴发H5N1,H9N2亚型禽流感,并存在病毒突破种问屏障感染人的病例】,赋予禽流感全新的公共卫生意义.2004.2005年东南亚暴发H5N1亚型禽流感,截止到2005年7月6日,确诊人感染病例108例,死亡54例,扑杀家禽1.4亿羽,损失惨重.禽流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒成员,病毒基因组由单股,负链,8节段RNA组成,编码lO个基因,其中第4,第6收稿¨期堆金项II作者简介通讯作者节段RNA分别编码血凝素(HA),神经氨酸酶(NA),其抗原性差异
8、,确定病毒亚型的划分,目前已知HA共有l6种亚型(H1.H16),NA共有9种亚型(Nl.N9)l.NA是A型流感病毒主要表面抗原之一,具有糖苷外切酶活性,可水解细胞表面受体特异性糖蛋白末端的N.乙酰基神经氨酸.病毒在细胞表面成熟时,NA可移去细胞膜出芽点上的神经氨酸,有利于子代病毒粒子的成熟和释放.NA的另一种作用
