临床标本细菌培养相关问题讨论-周庭银 [兼容模式]

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1、周庭银第二军医大学长征医院实验诊断科主任技师；主办国家继续教育“疑难菌株分离与鉴定”学习班15期；研制多功能体液显色培养瓶等培养基；获国家实用性专利4项、发明专利1项；主编专著7部，参编著作5部,其中《临床微生物学诊断与图解》获华东地区优秀科技图书一等奖；第一作者发表论文40余篇；临床标本细菌培养相关问题讨论上海长征医院周庭银主要内容¢痰标本¢血培养¢无菌体液一、痰标本痰标本存在的问题标本不符检验要求：痰标本中有食物残渣、菜叶唾液标本量少标本干枯非无菌容器留取标本标本留置时间长（苛氧菌）痰涂片∑是用来评价标本质量∑细菌类别、真菌∑寄生虫∑？？？前处理V洗痰

2、：灭菌生理盐水消化液冰冻过滤V液化：痰标本液化（胰酶、二硫苏糖醇）生理盐水清洗痰液V直接涂片、直接接种专利号：201320554637.6镜检：是用来评价痰标本质量？V用三分类标准（观察白细胞和上皮细胞数量1975）。A低倍镜下白细胞＞25，上皮细胞＜10B低倍镜下白细胞＞25，上皮细胞＜25C低倍镜下白细胞＜10，上皮细胞＞25A类标本，箭头所指的都是白细胞，可见白细胞大约在40～50，上皮细胞1～3。B类标本，左箭头所指的是白细胞，右箭头所指是上皮细胞，白细胞大约在40～50，上皮细胞26～30。C类标本，箭头所指的是上皮细胞，可见上皮细胞30～35，

3、白细胞3～5。痰标本革兰染色：观察细菌的形态大小和排列方式，染色属性、初步判断细菌种类、真菌。革兰阳性球菌，单个、成双短链排列，疑似为链球菌，最终鉴定为口腔链球菌。箭头所指的就是呈链状排列的球菌革兰阴性杆菌，长、短两种散在排列，疑似为两种细菌，最终鉴定为产气肠杆菌和铜绿假单胞菌的复合菌感染。菌丝和孢子，革兰阳性，菌体呈卵圆形，疑似为真菌感染，最终鉴定为热带念珠菌和光滑念珠菌的复数菌感染。（A）吉姆萨染色（×400）（B）革兰染色（×100）A与B？接种方式：V接种环V棉签（消化液或者生理盐水）∑痰涂片与培养结果间的关系三分类涂片与培养结果间的关系表：492

4、例痰标本涂片与培养结果的比较ABC总数例数百分比%例数百分比%例数百分比%涂片+培养+13270.598949.171411.29235涂片‐培养‐1910.162212.154032.2681涂片+培养‐21112311.2348265326.5337298329.83106涂片‐培养+158.022212.153326.6270合计187181124492痰涂片与培养关系表：368例合格痰标本涂片和培养结果对照标本数涂片(细菌)培养百分率（%）221++60.0541‐‐11.1469+‐18.7537‐+10.05注：368（A:187;B:181）

5、涂片阳性培养阴性∑可能是痰标本中苛养菌不能在普通培养基上生长或者是其他生长缓慢的细菌∑痰标本不及时送检造成留置时间过长可以导致细菌死亡∑厌氧菌感染，在普通条件下不能生长∑结核杆菌、嗜肺军团菌等，涂片阴性培养阳性∑有可能是涂片太薄，没有挑取脓性或粘性标本∑不动杆菌属，其镜下形态呈革兰阴性球杆菌，与正常菌群奈瑟菌相似，易混淆观察平板的生长状况（第二天）∑血平板：仔细观察血平板上菌落情况，辨别1.正常菌群（草绿色链球菌、奈瑟菌等）;2.致病菌（流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、卡他莫拉菌、溶血性链球菌）;3.条件致病菌（大肠、肺克、金葡等），排除正常菌群后,挑取疑似致病

6、菌或条件致病菌的单个纯菌落，分别进行涂片，根据涂片结果进行必要生化或上机鉴定。∑巧克力平板：观察巧克力平板上菌落，排除其他G-杆菌。是否有水滴状菌落（流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌），涂片染色卫星试验或因子试验或上机鉴定。麦康凯平板上菌落：挑取疑似条件致病菌的单个纯菌落进行生化鉴定或上机鉴定，并同时作药物敏感试验。∑平板上多少菌落需要鉴定及报几种病原菌？若平板上发现多种的条件致病菌，仅需报两种（最多三种），寻找优势菌。若平板上出现一种条件致病菌少于五个菌落，不用进行鉴定，但若平板上发现疑似致病菌（肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等）不管菌落多少，需进行生化鉴定和药敏

7、试验。∑注：若发现平板上菌落不纯,则需分纯后再进行生化鉴定。∑念珠菌属、曲霉菌如何进行痰培养半定量菌落计数？表：痰标本在平板上的菌落量化指标划线区菌落数目（cfu/皿）分级第1区第2区第3区少见(+)<10少量(()++)>10<5中等(+++)>10>5<5多量(++++)>10>5>5最后鉴定∑在发鉴定结果报告时，不要过度依赖于仪器。因为机器有时也会出现鉴定错误，∑例如曾经发现仪器鉴定为摩根摩根菌，对照原始平板发现麦康凯平板上为粉红色菌落，与仪器鉴定结果不符，重新涂片为革兰阴性球杆菌，进进步一步鉴定鉴定最终为鲍曼不动杆菌。有时同一种细菌在不同的机器上会

8、出现不同的结果，几种常见的报告方式（1）查见致病菌报告菌名，认为定