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1、新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达及意义作者：宋文秀，曹云涛，刘华庆【关键词】脑缺血【Abstract】AIM:Toobservesynaptophysin(Syp)express!oninhippocampalCAlregionof7dayoldWistarratsaftercerebralischemiareperfusion・METHODS:ImmunohistochemicalmethodwasusedtomeasuretheexpressionofSypinthehippocampalCAlregionafterreperfusion.R
2、ESULTS:TheexpressionofSypinhippocampalCAIregionincerebralischemiareperfusiongroupincreasedat3dafterreperfusionandreachedthehighest1evelat7d・Thecorrectedopticaldensity(COD)valuewassignificantlyhigherthanthatintheshamopeTationgroup(卩<0.01).CONCLUSION:Neuralplasticityoccurrsat3dand
3、continuesto14daftercerebralischemiareperfusioninnewbornrats・Sypisagoodindexindicatingtheregenerationofneuronandnervousaxons・【Keywords】cerebralischemia;synaptophysin;hippocampalCAlregion;rats,Wistar,animals,newborn【摘要】目的:观察新生Wistar大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达•探讨中枢神经系统的可塑性•方法：应用免疫组化方法观察新生鼠脑
4、缺血再灌注后不同时点脑组织突触素的表达•结果:缺血再灌注3d突触索表达开始增高，7d达高峰，14d时免疫活性仍高,其矫正吸光度值与对照组比较有显著性差异(P<0.01)•结论：新生Wistar大鼠脑神经细胞损伤后具有修复的可塑性，其吋间持续至缺血再灌注后14d・突触素检测能较好地反映神经元和轴突的代偿再生情况.【关键词】脑缺血；突触膜糖蛋白；海马CA1区；大鼠，Wistar；动物，新牛：0引言突触素(synaptophysin,Syp)是一种与突触结构和功能密切相关的膜蛋白，Syp作为突触囊泡的一种特异标志性蛋白，其数量和分布密度可间接反映突触的密度［
5、1］，突触重建时其表达明显增多，与神经可塑性密切相关•近年来，国内外研究［2］发现机体在缺血缺氧吋,能反映神经细胞代偿及重塑的Syp的表达和生成增加•我们旨在研究新生鼠脑缺血再灌注后突触素的变化规律，探讨中枢神经系统的可塑性.1材料和方法1.1材料出生后7dWistar大鼠70只(遵义医学院实验动物中心)，体质量18〜22g,雌雄不拘，随机分为假手术组和缺血再灌注组，每组35只.lOOOu青霉素ip预防感染，30g/L戊巴比妥钠（40mg/kg）ip麻醉.抗Syp抗体（即用型）：鼠抗人mAb（DAKO公司）・Mias99B图像分析系统（四川大学图像图形研究所
6、）.1・2方法1.2.1脑缺血模型的制作①假手术组：分离动物右侧颈总动脉，不阻断1111流；②缺血再灌注组：阻断右侧颈总动脉45min再灌注•两组均于术后7个时间点即2,6,12,24h和3,7,14d断头处死动物，每时间点5只，取右侧大脑半球用40g/L多聚甲醛固定待测•制模成功标准为结扎右侧颈总动脉后2h对侧（左侧）肢体活动障碍.1.2.2标本制备及Syp检测采用免疫组织化学Envision二步法.取标本固定24h,石蜡包埋，进行海马CA1区、皮层连续冠状切片，片厚4um.切片常规脱蜡和水化，微波抗原修复lOniin,室温.下自然冷却20min,蒸馄水漂
7、洗后置于PBS（pH-7.4）中，用30g/L过氧化氢避光孵育20min以阻断内源性过氧化物酶，PBS漂洗5minX3,加20uL一抗，4°C冰箱孵育过夜，PBS漂洗5minX3,加20uL相应的EnvisionTM复合物，37°C孵育30min,PBS漂洗5minX3,DAB显色,蒸憾水漂洗、复染及封片.以PBS代替一抗作阴性对照.1.2.3图像分析用图像分析系统测量切片海马CA1区Syp吸光度值（A值），每只鼠5张切片，每张切片测2次，每次所测面积大于海马CA1区的50%,取其平均值作为Syp的A值；同时测定同一张切片上月并月氐体的A值以作为Syp的背景
8、值，用CA（矫止吸光度）值进行比较和分析，CA=实测
