新生鼠脑缺血再灌注后海马ca1区突触素的表达及意义论文

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1、新生鼠脑缺血再灌注后海马CA1区突触素的表达及意义论文宋文秀，曹云涛，刘华庆【关键词】脑缺血【Abstract】AIM:Toobservesynaptophysin（Syp）expressioninhippocampalCA1regionof7dayoldETHODS:ImmunohistochemicalmethodeasuretheexpressionofSypinthehippocampalCA1regionafterreperfusion.RESULTS:TheexpressionofSypinhippocampalCA1regioni

2、ncerebralischemiareperfusiongroupincreasedat3dafterreperfusionandreachedthehighestlevelat7d.Thecorrectedopticaldensity（COD）valueoperationgroup(P0.01).CONCLUSION:Neuralplasticityoccurrsat3dandcontinuesto14daftercerebralischemiareperfusioninneia;synaptophysin;hippocampalCA1reg

3、ion;rats,ias99B图像分析系统（四川大学图像图形研究所）.1.2方法1.2.1脑缺血模型的制作①假手术组：分离动物右侧颈总动脉，不阻断血流；②缺血再灌注组：阻断右侧颈总动脉45min再灌注.两组均于术后7个时间点即2,6,12,24h和3,7,14d断头处死动物，每时间点5只，取右侧大脑半球用40g/L多聚甲醛固定待测.制模成功标准为结扎右侧颈总动脉后2h对侧（左侧）肢体活动障碍.1.2.2标本制备及Syp检测采用免疫组织化学Envision二步法.取标本固定24h，石蜡包埋，进行海马CA1区、皮层连续冠状切片，片厚4μm.切片常规

4、脱蜡和水化，微波抗原修复10min，室温下自然冷却20min，蒸馏水漂洗后置于PBS(pH=7.4)中，用30g/L过氧化氢避光孵育20min以阻断内源性过氧化物酶，PBS漂洗5min×3，加20μL一抗，4℃冰箱孵育过夜，PBS漂洗5min×3，加20μL相应的EnvisionTM复合物，37℃孵育30min，PBS漂洗5min×3，DAB显色，蒸馏水漂洗、复染及封片.以PBS代替一抗作阴性对照.1.2.3图像分析用图像分析系统测量切片海马CA1区Syp吸光度值（A值），每只鼠5张切片，每张切片测2次，每次所测面积大于海马CA1区的50%，取

5、其平均值作为Syp的A值；同时测定同一张切片上胼胝体的A值以作为Syp的背景值，用CA（矫正吸光度）值进行比较和分析，CA＝实测值－背景值，以避免染色过程中非特异性染色所造成的误差.1.2.4病理学检查取相应部位切片行HE染色，观察其病理学改变.统计学处理：各组CA值以x±s表示.用完全随机设计两样本比较的秩和检验分析.P0.01为有显著性差异.2结果2.1Syp的表达Syp阳性染色呈棕黄色点状或颗粒状沉积，位于胞质内，胼胝体、血管和胶质细胞不着色，阴性对照切片未见Syp免疫产物.假手术组海马CA1区可见Syp表达，免疫反应物颗粒很小，分布弥散

6、（Fig1），随日龄增加免疫反应产物CA值逐渐增高；缺血再灌注组海马CA1区Syp在脑缺血再灌注3d免疫活性增高，7d达高峰，14d免疫活性仍高，免疫产物的颗粒较大、密集、染色深（Fig2）；CA值高于假手术组，两组比较均有显著性差异（P0.01,Tab1）.表1新生r38000的酸性钙结合糖蛋白，在神经元胞体合成后主要转运至轴突终末,特异性地分布于突触前囊泡膜上.Syp分布非常广泛，在神经组织如脑、脊髓、视网膜和神经肌接头的突触前成分、肾上腺髓质，以及各类内分泌细胞等都有分布［3］.免疫电镜研究证实，Syp位于小圆形或扁形突触囊泡质膜面，光镜

7、下标记的Syp颗粒样物实际上是成簇的囊泡，而95%以上的新皮质突触前终末均含有这种小突触囊泡［4］.Syp作为突触前终末标记物，使用免疫组化方法及图像分析技术检测其免疫阳性物质在给定区域的吸光度值，可以间接评定突触的密度及分布.免疫组化研究证实,Syp的免疫活性在成熟脑组织中高度集中在突触前轴突末梢内，围绕着神经元和其树突.因此该蛋白被广泛用于标记轴突终末,.freelaru等［6］通过制备脑缺血模型，检测Syp的免疫活性，表明在脑缺血后，海马CA1区的突触前的恶化先于CA1区的迟发性神经元死亡.神经细胞在受到各种有害因素损伤后，其轴突在失去靶

8、器官后会出现轴突的出芽和形成许多侧枝，其突触前囊泡的数量增加；另外其突触前膜功能也代偿性增加，使Syp免疫活性增高.突触素能调节神经元突起延伸以及在中