临床医学论文-CXCL12促进人胃癌AGS细胞体外侵袭及其机制研究.doc

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1、临床医学论文-CXCL12促进人胃癌AGS细胞体外侵袭及其机制研究【摘要】H的研究趋化因子CXCL12对人胃癌AGS细胞侵袭性的影响。方法在体外用不同浓度CXCL12处理AGS细胞后，应用Transwcll侵袭实验、RTPCR、明胶酶谱分析法、ELISA法，观察CXCL12对肿瘤体外侵袭能力及金属基质蛋白酶MMP9活性和VEGF表达的影响。结果CXCL12作用后，人胃癌AGS细胞侵袭能力明显增强，并具一定的量效关系；金属基质蛋白mMMP9活性呈剂量依赖性增强，VEGF的分泌增加。结论CXCL12在体外可增加人胃

2、癌AGS细胞的体外侵袭性。【关键词】趋化因子；CXCL12；胃癌；胃黏膜上皮细胞；金属基质蛋白酶9ABSTRACT：ObjeeliveTostudytheeffectsofCXCL12ontheinvasionofthehumangastriccarcinomaccl1(AGSccl1).MethodsAGScellswereprelrealedwithdifferentconcentrationsofCXCL12invitro,andcellmigrationassay,RTPCR,zymographyand

3、ELISAwereusedtoobservedtheeffectsofCXCL12onmoti1ity,invasionandMMP9activityandmRNAexpressionofAGScells・ResultsCXCL12couldincreaseinvasionabi1ityofAGSccl1invitro.TheactivityofMMP9wasincreasedinadosedependentmanner.ThemRNAexpressionofMMP9ofpretreatedAGScelIswa

4、supregulated・ConclusionCXCL12couldincreaseinvasionabi1ityofhumangastriccarcinomacellsinvitro.KEYWORDS：Chemokine;CXCL12;GasIriccancer;AGScells；MMP9肿瘤的侵袭是肿瘤转移的重要环节，是肿瘤细胞粘附、酶降解基质、移动、基质内增殖等一系列过程的表现[1]o本研究体外观察了趋化因子CXCL12对肿瘤体外基质金属蛋白酶MMP9活性以及VEGF表达的影响，以探讨CXCL12促进胃癌

5、细胞侵袭转移的作用机制。1材料和方法1.1实验材料CXCL12购自美国Signm公司；朕蛋白iW和DMEM培养基(高糖)购自Gibco公司(USA)；胎牛血清购自杭州四季青公司(CHTNA)；TrizolReagent购自TaKaRa公司(JAPAN)；MMLV逆转录酶、RNA酶抑制剂、01igo(dT)＞dNTP混合物购自Promcga公司(USA)；引物序列由上海Invitrogcn公司(USA)合成;Transwcl1侵袭小室购自Costar公司(USA)；人工基质胶(Matrigel)购自BD公司(SP

6、AIN)。1.2实验方法1.2.1细胞培养人胃癌AGS细胞购自武汉大学细胞典藏屮心(CTCC)oAGS细胞贴壁培养于含10%胎牛血清＞100U/ml青霉素＞100mg/ml链霉素的DMEM高糖培养基,37°C、5%CO2饱和湿度条件下培养。取对数生长期细胞进行实验。按如下分组进行实验:空白对照组、50ng/mlCXCL12组和100ng/mlCXCL12组，每组设置3个平行孔。侵袭能力的测定采用Transwell侵袭小室:Matrigel胶（30ug/孔）包被聚碳酸酯膜（8um孔径）内表面，以此膜分隔上、下小室

7、。无血清DMEM调整细胞浓度为1X106/mL在上室中加入100u1细胞悬液,在下室中加入600ul含不同浓度CXCL12的无血清培养液，然后在37°C的培养箱屮孵育48h,取出滤膜，用4%的多聚甲醛固定，棉签擦去滤膜上未贴壁的细胞，甲醛固定5min,HE染色。400倍光镜下计数穿过聚碳酸酯膜的细胞数，以侵袭细胞的相对数H表示肿瘤细胞侵袭能力。随机计数5个视野内的细胞数，取平均值进行统计处理，每组计数3份样本。1.2.3RNA提取和逆转录聚合酶链反应（RTPCR）RNA提取参照RNATrizol提取试剂盒的操作

8、说明书进行。提取的RNA纯度由A260/A280比值和1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定。取1ugRNA,以0ligodT为引物逆转录成cDNA。反应体系（20u1）：5XMMLVbuffer4u1,dNTPlOmmol,RNase20U,MMLV100U,01igodT20pmobRNA1ugo逆转录反应条件：20°ClOmin,42°C60min,95°C5min。取2u1的逆转录产物行P