转 Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选和鉴定-论文.pdf

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1、江西农业大学学报2014，36(3)：609-613http：／／xuebao．jxau．edu．cnActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensisDOI：10．13836／j．jjau．2014099王春生，张志崇，张秋婷，等．转Temporin—GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选和鉴定[J]．江西农业大学学报，2014，36(3)609—613．转Temporin-GFP山羊乳腺上皮细胞株的筛选和鉴定王春生，张志崇，张秋婷，朴善花，仇雨歌，安铁洙(东北林业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨150040)摘要：为了获得山羊乳腺特异表达中国林蛙抗菌肽的转基因细胞株，

2、研究利用前期工作中获得的山羊乳腺特异表达载体Tem—GFP—pBC1转染传代培养的山羊乳腺上皮细胞，并经G418筛选获得转基因阳性细胞。其结果，获得特异表达GFP和抗菌肽基因的转基因阳性细胞；转基因阳性细胞和冷冻复苏的转基因阳性细胞经培养，其细胞形态和生长曲线均正常；经PCR检测Tem—GFP-pBC1已整合人山羊乳腺上皮细胞的基因组中，且与对照组相比，转基因细胞可以检测到Tem-GFP的表达。结果表明，获得了能够在山羊乳腺中特异表达Tem—GFP融合蛋白的转基因阳性细胞。关键词：中国林蛙；iE菌肽；山羊；乳腺上皮细胞；转基因中图分类号：Q813．2文献标志码：A文章编号：1000—2286

3、(2014)03～0609—05TheScreeningandIdentificationofTransgenicGoatMammaryEpithelialCellswithTemporinGeneWANGChun—sheng，ZHANGZhi—chong，ZHANGQiu—ting，PIAOShan—hua，QIUYu—ge，ANTie—zhu(CollegeofLifeScience，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China)Abstract：InordertoobtainRanatemporariachensinensi~skinan

4、timicrobialpeptidegenesexpressedingoatmammaryepithelialcells，goatmammaryepithelialcellsweretransfectedwithmammaryglandspecificex—pressionvectorTern。_GFP_‘pBC1constructedinthepreviousworkbycationicliposomemethodandculturedwithG418一resistantcel1．AfterPCRwasidentified，thetransgeniccelllinewithTemwases

5、tablished．TheG418positivecellsweredetected．Theresultswereasfollows．G418一resistantcellscouldexpressGFPandTern．Mor—phologyofthetransgeniccellsafterfreezing—thawingwassimilartothatofnormalmammaryepithelialcells，thecellgrowthcurvewasin“S”shape，PCRresultsshowedthatthevectorconstructedwasintegratedintoge

6、—nome．Comparedtothecontrol，thetransgeniccellcouldexpressTern—GFP．Thetransgeniccellswithtemporin—GFPwerefiltrated，andlaythefoundationforthetransgenicgoatwithexpressiontemporininmammary．Keywords：Ranatemporariachensinensis；antimicrobialpeptides；goat；mammaryepithelialceils；trans—genic收稿日期：2013-11—15修回日

7、期：2013—12—21基金项目：国家自然科学基金(31000990，30771538)和国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008—004B)项目资助作者简介：王春生(1979一)，男，副教授，博士，主要从事动物体细胞重编程研究，E—mail：wangchunsheng79@163．com；通信作者：安铁洙，教授，博导，E—mail：antiezhu@tom．con。·610·江西农业大学