转谷氨酰胺酶产生菌的筛选和鉴定

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第10卷第2期淮海工学院学报Vo1．10No．22001年6月JournalofHualhaiInstituteofTechnologyJune2001文章编号：1008—3499(200t)O20044—03转谷氨酰胺酶产生菌的筛选和鉴定祖海珍，陆兆新，陈义华。(I_淮海工学院食品工程系，江苏连云港222005；2．南京农业大学食品科技学院，江苏南京210095)摘要：主要夼绍了转谷氨酰胺酶产生茵的筛选以及菌种的鉴定。用稀释潦布方法进行初筛以期得到链轮丝茵，再通过N苄酯基一I谷氨酰甘氨酸比色法确定此菌是否

2、产转谷氨酰胺酶。然后根据其在不同培养基上的培养特征以及生理生化特征来进行产酶茵的菌种鉴定。关键词：转谷氨酰胺酶；链轮盐茵；筛选；鉴定中图分类号Q555文献标识码：A0前言菌种：筛选到的1#、2#、3茸。鉴定培养基：高氏合成1号琼脂、察氏琼脂、葡萄糖天门冬素琼脂、克氏合成1号琼脂、淀粉琼脂、食品蛋白质是人类必需的营养素之一，并对食品的质地、可塑性等起决定性作用。改良食品中的蛋明胶液化培养基、牛奶凝固胨化培养基、淀粉水解琼白质可以改普其凝胶性、乳化性、黏度、起泡性等物脂、纤维索上生长培养基、硫酸亚铁培养基、碳源利用培养基。理性质在利用酶改良蛋白质性质方面已进

3、行了许多研究，转谷氪酰氪酶是可利用的改良蛋白质性质1，2菌的筛选酶的一种]。1989年，日本学者Ando等经过大量的1．2．1土壤采集链霉菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量较多，不同植被或是不同筛选，终于从轮枝链霉菌属(Streptovertici[1ium性质的土壤也直接影响链霉菌的种类与数量。采土sTV)中提取到了微生物来源的MTG(Microbial的季节以春、秋为宜，但应避免在雨季中采土。当选transglutaminaseMTG)这是一种非Ca依赖型择好采土地点后，用小铲除掉表土，取5～10cm深酶一，Sakamoto等研究了MTG

4、1对固体酪蛋白、大豆分离蛋白(SPI)、明胶蛋白、蛋清、蛋黄等的性质改处的土壤约3O～50g装入灭菌的纸袋中，在纸袋中编号，写上采集地点、植被、时期等采集的土样一般变，证明它可以明显提高这些蛋白的凝胶性，并且研究了各种蛋白在MTG1中获得最佳凝胶强度的条风干后进行分离，因为新鲜的土样中细菌数量较多，而风干后土样中不产孢子的细菌数量明显减少，产件。由于这种酶对蛋白质的性质有着明显的改良作孢子多的链霉菌变化不大。用，其在食品中的应用越来越得到重视针对这一情1．2．2初筛称取采集的土样1g，倒^装有9mI况，本研究主要进行了产酶菌株的筛选工作，期望能无菌水的试

5、管中，振荡5～10min左右，即成10_1浓够得到新的产转谷氨酰胺酶的菌株，以期提高酶的产量度的悬液，静置后取1mI上悬液制备成1O、1O、1O～、10不同浓度的稀释度作为分离，但要1材料与方法根据土壤微生物的数量和比例以及所用的培养基决定稀释度，一般选10、10～、10三个稀释度土壤1．1材料稀释液制好后，将熔化好分离用的培养基倒人灭菌的培养皿中，待凝固后用无菌细管吸取10～、10、土样来源南农校园、紫金山、玄武湖。分离培养基葡萄糖天门冬素琼脂培养基。10三个稀释度的稀释液0．05mL(1～2滴)滴在收藕日期：2000一ii—i4基金项目：20∞年教育

6、都骨干教师基金资助珥目(i99905)南京农业大学食品科技学院院长，教授，硬土生导师。维普资讯http://www.cqvip.com第2期租海珍等：转谷氪酰胺酶产生菌的筛选和鉴定45凝固的培养基表面上，用无菌涂布棒涂匀，将培养皿表l三株菌的形态特征倒置于28℃温箱中培养7～l5天。根据放线菌菌落TablelTheshapeandcharacteristicsofthreestrains的特征，从反复实验得到的108株菌落中挑取出了34株可疑菌落进行划线培养，一般放在28C恒温箱中培养2～3天，利用单染色法镜检，其原理是利用单一燃料对菌体进行染色的一种方

7、法，此法操作简便、快捷，适用于菌体一般形态的观察1．2．3酶活的测定pH=7．0的发酵培养液由2．0的聚蛋白胨、2．0的可溶性淀粉、0．2的磷酸2．2酶活性的测定氢二钾、0．1的硫酸镁、0．2的酵母膏和0．05用筛选到的l#、2#、3#菌做产酶试验，0号管的消泡剂配成(以上均为质量分数)，接人初筛得到作为参比管，只加入N一苄酯基一I一谷氨酰甘氨酸液，的链轮丝菌，在30C下培养3天后离心得到粗酶结果如表2所示。液。pH：6．0的N一苄酯基I一谷氨酰甘氨酸培养液表2在一525nm下剐的吸光度由100mM的CBZL一谷氨酰甘氨酸、200mM的Table2The

8、measuredab~；orptiondegreewhen一525ilmTris