转线粒体细胞株的构建与鉴定

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1、温州医学院硕士学位论文wasnormal．TheparentalHeLacell，mitochondrialMorphologyarenormal，showingroundoroval，matrixmoredense，cristaeclear．4．TransferringofmitochondriaintohumancellslackingmtDNA(pocells)，weobservedrecoveringmitochondrialmorphologyoftransmitochondrialcellthroughTEM．Wecouldfoundth

2、atthefusioncellcouldbesupporttogrowinginthemediumwith110pyruvate／uridine．AnalysisforPCR,thePCRproductisthesametothewildtypecellline．Conclusion·1．ThishumancelllinecompletelylackmtDNA(pOHeLacells)．Itcanbeutilizedtoconstructtransmitochondrialcellline．Inparticular,Toinvestigatenucl

3、eomitochondrialinteractionsandthemolecularpathogeneticmechanismsofmtDNAmutation，itwouldbeusefultomanipulatethemtDNAcomplementofacell，movemitochondriafromonecellularenvironmenttoanother．Inourstudy,wecouldintroducetheT10003CmutationoftRNAG～geneintoresearch．2．Weestablishatransmito

4、chondrialcellmodel，thiscelllineCallbeappliedtoassessmentofthemitochondrialmorphologyandfunctionoffusioncellsandisfoundtobeofgreatuseinevaluatingthegeneexpressionofmitochondrialgenomeatdifferentlevels．Keywords：transmitochondrialcellmodel；eellfusion；TransmissionElectronMicroscope

5、；mitochondrialvacuolation；diabetesmellitus5温州医学院硕士学位论文刖舌线粒体基因突变糖尿病(MIDD)的发现是近年来糖尿病分子遗传学研究的重要进展之一，并成为糖尿病领域研究热点。关于线粒体糖尿病，迄今已有很多报道⋯21。自1992年VandenOuweland[131首次确认了由线粒体DNA(mtDNA)核苷酸3243A-÷G突变引起糖尿病以来，各国学者已先后在不同的种族发现本病，它是目前所知单基因突变致糖尿病中患病率最高的一种。1996年Maassen和Kadowaki两位学者将线粒体糖尿病(materna

6、llyinheriteddiabetesanddeafness，MIDD)作为糖尿病的一种新亚型正式报道【141。gAnderson等(1981)测定出人mtDNA的全部序列以来，其作为一种结构相对简单而精致的真核生物基因组，引起人们的极大兴趣。mtDNA3子子上无核酸结合蛋白，缺少组蛋白的保护，而且线粒体中无DNA损伤修复系统，这就使得mtDNA分子易于发生基因突变，一个细胞内通常有数百个线粒体，因此每个细胞内拥有数千个mtDNA，而每个DNA分子都可能发生突变，所以mtDNA的突变率相当高，是核DNA的10～100倍。这将造成个体及群体中mtDN

7、A序列的极大不同，任何2个人的mtDNA，平均每1000个碱基对就有4个不同，人群中存在多种无害到中度有害的mtDNA突变，且高度有害的突变目前不断增多，但是有害的突变会通过选择而消除，故线粒体遗传病表型并不常见，而突变的基因型却很普遍。。线粒体基因突变导致的糖尿病是一种新的类型，约占全球糖尿病人群中的1．5％。近年来发现有20余种线粒体基因突变与糖尿病有关(表1)，其中最常见的mtDNA的tRNA基因3243位点A—G突变，该突变发生于16SrRNA与tRNA交界处，改变TtRNALEU(UUR)双氢尿苷环，引起线粒体末端转录损害，从而使线粒体蛋白

8、质合成异常和功能缺陷，影响呼吸链的组分与功能而致胰岛B细胞葡萄糖氧化磷酸化障碍，ATP产生不足，致胰岛素分泌