大豆苷和染料木苷对山羊乳腺上皮细胞增殖的影响-论文.pdf

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1、·17O·生理生化中国畜牧兽医2014年第4l卷第3期大豆苷和染料木苷对山羊乳腺上皮细胞增殖的影响李艳，陈凤，吕晓峰，彭春燕。(1．盐城市农产品质量监督检验测试中心，江苏盐城224002；2．扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009)摘要：本试验研究了不同浓度的大豆苷(daidzin)和染料木苷(genistin)对山羊乳腺上皮细胞(mammaryglandepithelialcells，MEC)增殖的影响，主要采用MTT法研究不同浓度的大豆苷和染料木苷刺激影响细胞增殖的状况。结果表明，2种苷纳克

2、级别浓度组较微克级别浓度组对细胞增殖的影响更明显；处理细胞48h较24和72h对细胞增殖的影响更明显；10ng／mi大豆苷和10、100ng／mL染料木苷均能显著促进山羊MEC增殖(P<0．05)。关键词：大豆苷；染料木苷；山羊乳腺上皮细胞；细胞增殖中图分类号：$814文献标识码：A文章编号：16717236(2014)03—0170～04大豆苷(daidzin)和染料木苷(genistin)都属于MTT浓度为5mg／mI，避光保存。大豆异黄酮类，大豆异黄酮(isoflavones)是植物雌全自动酶联免疫

3、分析仪；倒置显微镜(Olympus激素的一类，结构与人体性腺分泌的雌激素相似，具CKX41)；CO培养箱(Shellab)；移液器、冷冻离心有抗癌、抗氧化及雌激素样等多种生物学作用(吴机(Eppendorf)；超净工作台(VS一1300U)；血球计数素萍等，2007)。目前，大豆异黄酮是动物营养学的板；96孔细胞培养板(Corning)。研究热点，有试验证明，大豆异黄酮可促进动物繁1．2方法殖、泌乳和生长，显示其可以作为动物生长的调节剂1．2．1MTT法检测细胞增殖单细胞悬液接种和促进剂(赵敏等，2005

4、)，尤其对乳腺癌有积极的预于96孔培养板，每孔10。～1O个细胞，每孔加培养防和治疗作用(井乐刚等，2002)。有关大豆异黄酮基总量为200I，37oC、5CO培养箱中培养一在畜禽生产上的作用国内外研究并不多，国内自20段时间(依据试验目的决定培养时间)后加入MTT世纪90年代以来该领域的研究主要集中在单胃动工作液(20L／孔)，继续培养4h；吸出孔内培养物，有关大豆异黄酮在反刍动物上的应用及其促进液，加入DMSO液(150t~L／TL)，室温下，将培养板泌乳性能、常规乳成分改善的研究在国内鲜有报道震荡1

5、0min，使蓝紫色结晶物充分溶解；在490nm(朱河水等，2006)，尤其是在细胞水平上的研究，目波长条件下，全自动酶联免疫分析仪上检测各孔前尚无相关报道。本试验通过MTT法检测不同浓D值。度的大豆苷和染料木苷对山羊乳腺上皮细胞(mam—1．2．2大豆苷和染料木苷处理山羊MEC在基础maryglandepithelialcells，MEC)增殖的影响，并培养液中传代培养，以5×10／mL的密度重新接种对其机理进行初步探讨，为以后在细胞水平研究大于96孔板，每孔200fI，24h后待细胞进入生长状豆异黄酮类

6、对山羊泌乳性能的影响奠定基础。态，进行试验分组，对照组和处理组同时换培养基，1材料与方法对照组继续为基础培养液，处理组则为加入含有不1．1材料同浓度苷的培养基，对照组与处理组血清浓度保持1．1．1试验材料2～3代山羊乳腺上皮细胞由扬一致。每种浓度各设6个复孔。各种苷的浓度设州大学动物营养与微生态实验室冻存。置：浓度为1g／mL。作处理时，用不含胎牛血清的1．1．2主要试剂与仪器大豆苷、染料木苷(南京DMEM／F12培养基稀释，保留胎牛血清最终浓度泽朗生物技术公司，标准品，浓度为99．990o)；台盼为10

7、的体积，则不同体积的苷溶液与不同体积的蓝、二甲基亚砜(DMSO)；0．25胰蛋白酶、0．04DMEM／F12基础培养基混合构成含有大豆苷和染EDTA、胎牛血清(HyClone)；DMEM／F12培养基料木苷不同浓度的处理组培养液。(Gibco)；噻唑蓝(MTT)：用灭菌过的超纯水配置1．2．3大豆苷和染料木苷微克级别的浓度设置根据相关文献及前期试验，拟将2种苷的作用浓度收稿日期：20130807作者简介：李艳(1984～)，女，江苏人，硕士生，研究方向：农产品设置在微克级别，浓度梯度为：0、1、5、10、

8、质量安全检测。i00、200fg／mI。中国畜牧兽医2014年第41卷第3期生理生化·171·1．2．4大豆苷和染料木苷纳克级别的浓度设置显著下降(P<0．05)，表明微克浓度级别的大豆苷根据前期对大豆苷和染料木苷微克级别增殖作用效处理细胞48h后，对细胞生长有一定的影响，但是果试验数据的分析结果，确定大豆苷和染料木苷纳没有显著促进细胞增殖；1~g／mL染料木苷处理细克级别浓度梯度设置：0、1、5、10、100、1000ng／