大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响-论文.pdf

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1、中国畜牧兽医2013年第4O卷第1期奶业专栏·187·大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响穆莹，江连洲(1．东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨150030；2．国家大豆工程技术研究中心，黑龙江哈尔滨150030)摘要：通过体外细胞培养方法研究大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞增殖及泌乳性能的影响。取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞，用无血清培养基培养24h，使细胞同步化后分组试验。试验分空白对照组(Omg／L大豆异黄酮)和添加不同浓度大豆异黄酮(1、10、100、1000mg／L)组，培养48h后，采用CASY细胞计数仪检测细胞增殖能力与活力，高效

2、液相色谱检测G一酪蛋白和乳糖，甘油三酯检测试剂盒检测甘油三酯的分泌情况。结果表明，与对照组相比，10、100、1000mg／L大豆异黄酮组奶牛乳腺上皮细胞的增殖能力与活力显著增强(P

3、oflavone)是从大豆中分离提取品购于Sigma公司；甘油三酯检测试剂盒购于南京出的以3一苯并吡喃酮为母核的具有多酚结构}昆合建成生物工程研究所；奶牛乳腺上皮细胞由东北农物的统称，是大豆生长过程中形成的次生代谢产物业大学生命中心高学军教授赠；乙腈(色谱纯)为国(汪大敏等，2008)。大豆异黄酮是大豆中有效活性产试剂。物质之一，表现弱的雌激素双向调节作用，具有抗氧1．2主要仪器LC一1OAT高效液相色谱仪(日本化、抗肿瘤、促进机体生长等多种生理功能(Liu等，岛津，SPD一10A紫外检测器)；CO一150型CO。培养2006；Jiang等，2007

4、；徐春华等，2010)。研究结果表箱(日本)；DFC280倒置相差显微镜(LEICA，德明，大豆异黄酮在畜牧生产中能显著促进家畜生长国)；KQ一500DE型超声仪(江苏昆山)；SBA系列生(王月影等，2005)、提高蛋白质合成效率、改善畜禽化分析仪(赛诺迈德医学技术有限责任公司)；Mod—胴体品质(王利华等，2006)、改善繁殖性能(陈丰等，elDTCASY细胞计数仪(CASY，德国)；真空抽滤2010)、提高免疫力(李晓翠等，2011)等。目前，有关仪；HypersilNH色谱柱(大连依利特)；TSKgel大豆异黄酮在反刍动物上尤其是促进奶牛泌乳性

5、G3000PW色谱柱(日本)。能、常规乳成分改善的研究在国内有一些报道(杨慧1．3乳腺上皮细胞的培养将乳腺上皮细胞以1x敏等，2007；郝振荣等，2009；赵传毅等，2011)，而在10／mL培养液的密度接种至玻璃培养瓶中，用加乳腺细胞水平上的研究则鲜有报道。本研究以体外159／5胎牛血清的DMEM／F12培养基，在C0培养箱培养泌乳期奶牛乳腺上皮细胞为材料，研究不同浓中培养，每2d更换1次培养液，待培养瓶中细胞生度的大豆异黄酮对奶牛乳腺上皮细胞增殖与泌乳性长到汇合度为7O-80时即可用于后续试验。能的影响，从细胞水平上为大豆异黄酮在奶牛饲料1．4试

6、验设计将对数生长期的乳腺上皮细胞以方面的应用提供一定的试验依据。1×10／mL培养液的密度接种至6孔板中，细胞贴1材料与方法壁后用无血清的DMEM／F12培养基培养24h，然1．1主要试剂与细胞大豆异黄酮购于大连绿峰后分组进行处理。试验分为：空白组(无血清食品有限公司(纯度为98)；DMEM／F12培养基DMEM／F12培养基)和添加1、10、100、1000mg／L购于美国Invitrogen公司；胎牛血清购于杭州四季大豆异黄酮组(在空白组培养基基础上添加不同浓青生物材料有限公司；酪蛋白标准品和乳糖标准度的大豆异黄酮)。处理48h后收集各组细胞培养

7、收稿日期：2012-08—16液进行试验。每组均设3个平行。作者简介：穆莹(1982一)，女，黑龙江人，硕士生，研究方向：大豆1．5CASY细胞计数仪检测细胞增殖能力与活力加工技术。分别收取处理48h后的各组细胞样品，用Model通信作者：江连洲(1960一)，男，博士，教授，研究方向：大豆加工技术。DTCASY细胞计数仪检测细胞增殖能力与活力。·188·奶业专栏中国畜牧兽医2Ol3年第4o卷第1期1．6导L指标检澳4度，以乳糖浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立乳1．6．1高效液相色谱检测乳蛋白HPLC的检测糖标准曲线。细胞处理48h后，收集各组细胞

8、培养条件：TSK凝胶柱，7．8mm×300mm；柱温，室液，液相色谱检测乳糖含量。每个样品检测3次。温；紫外