中空纤维离心超滤-HPLC法测定注射用两性霉素B脂质体的包封率-论文.pdf

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1、第31卷第9期沈阳药科大学学报Vo1．3lNO．92014年9月JournalofShenyangPharmaceuticalUniversitySep．2014P．692文章编号：1006-2858(2014)09-0692-05中空纤维离心超滤～HPLC法测定注射用两性霉素B脂质体的包封率许萌，陈丹，蒋晔(河北医科大学药学院，河北石家庄050017)摘要：目的建立新型的中空纤维离心超滤法分离脂质体中游离药物，并结合HPLC法用于注射用两性霉素B脂质体的包封率的表征。方法采用新型中空纤维微量离心超滤(HF—CFUF)装置，在离心力的作用下，利用中空纤维超滤膜分离

2、游离药物和包封药物。色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18柱(250mmx4．6mm，5m)，流动相为乙腈一20mmo

3、·L乙二胺四乙酸二钠(体积比38：62)，流速为1．0mL·min，检测波长为405nm，柱温为30℃。结果两性霉素B质量浓度在0，670～21．4mg·L。。内与峰面积呈良好的线性关系(r=0．9997)，回收率均在97％以上，RSD不大于2％。结论中空纤维离心超滤装置基本保持了脂质体处方的原始的、稳定的存在环境(物理化学环境)，最大限度地减少了脂质体的泄露，结果准确且简便快速，为脂质体包封率的表征提供了一种新方法。关键词：中空纤维离心超滤

4、；包封率；脂质体；两性霉素B；HPLC中图分类号：R917文献标志码：A两性霉素B(amphotericinB，AmB)是从链(DA)[9-101、凝胶色谱法(SEC)¨、固相微萃霉菌的培养液中分离而得到的一类多烯类抗真菌取法(SPE)、离心超滤法(CF—UF)¨”I。药，被广泛用于治疗全身性真菌感染的抗真菌抗其中，DA法平衡时问长(≥3h)，并且消耗样品生素⋯。由于AmB大环的结构(图1)，它不能体积大。SEC法是一种经典的方法且被认为是通过皮肤吸收，因此，为了确保用药的有效性需要黄金标准，然而该法操作繁琐，并且由于洗脱液对大剂量给药。然而，大多数患者接受AmB

5、静脉脂质体进行了大量的稀释，会导致脂质体的泄露，滴注时都会出现发热、畏寒、寒颤、低血压、恶心、从而使测定结果不准确。SPE法同样存在由于洗呕吐、头痛和血栓性静脉炎等不良反应，这使得脱液的稀释导致脂质体泄露的问题18]。CF．UFAmB的应用受到了限制。针对AmB治疗剂法虽然简单省时，但是该方法在分离过程中会由量下具有比较严重的不良反应，将AmB制成脂于机械力的作用造成粒子的聚集和膜融合使脂质质体，可以明显降低毒性，提高治疗指数。体药物泄露。综上所述，上述方法均有不足之脂质体作为药物载体只有对药物的有效包处，例如：操作繁琐，分析时间长，消耗样品体积封，才可能较好地发

6、挥临床治疗作用。因此，包封大，脂质体泄露，游离药物质量浓度增加，回收率率是脂质体研究的重点，它不仅是评价脂质体制低等问题。剂的制备工艺和质量评价的重要指标之一，也是本研究在CF—UF的基础上提出了中空纤维较普通制剂发挥高效、低毒特点并提高药物治疗微量离心超滤法。将中空纤维垂直浸入样品溶液指数、降低药物不良反应并减小药物剂量的关中，由于离心力与中空纤维膜平行，游离药物可以键J。由此可见，包封率的测定是脂质体研究自由进出中空纤维内腔，避免了浓差极化；同时也中重要的考察项目。保持了脂质体溶液的内外平衡，避免了脂质体在测定包封率的关键是使脂质体与游离药物有分析过程中的泄露

7、问题。将此方法成功的应用于效分离，目前常用的包封率测定方法有透析法注射用两性霉素B脂质体包封率的表征，为脂质收稿日期：2013—10-28作者简介：许萌(1989一)，女(汉族)，河北保定人，硕士研究生，E-mailxumeng0622@126．com；通讯作者：蒋哗(1961一)，男(汉族)，河北石家庄人，教授，博士，主要从事药物的质量研究与控制，Te1．0311—86266069，E-mailjian—gye@hebmu．edu．cn。第9期许萌等：中空纤维离心超滤一HPLC法测定注射用两性霉素B脂质体的包封率693体包封率的分析测定提供了一种新方法。1支，加

8、生理盐水10mL分散并混匀，AmB质量浓度约为1g·L～，备用。0HO空白脂质体混悬液：取空白脂质体1瓶，加生理盐水10mL分散并混匀。2．3HF-CF-UF的步骤将中空纤维切成150mm的小段，放入水中OH超声清洗15min，晾干、备用。将一段清洗好的中NH2空纤维置入离心管中(图2)，并加入AmB脂质体混悬液0．2mL，6000r·rain离心15min，取出Fig．1ThestructuralformulaofamphotericinB中空纤维，用注射器从中空纤维一端口注入空气，图1两性霉素B的化学结构式压出纤维空腔内的超滤液(约5OL)，即得供试1仪器与材

9、料溶液，取