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时间:2018-10-28
《hplc法测定炔雌醇脂质体的含量及包封率 》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、HPLC法测定炔雌醇脂质体的含量及包封率陈云,陈涛,卢婷利,胡惠静,马玉樊【摘要】目的建立测定炔雌醇脂质体的含量及包封率的方法。方法采用HPLC法,以AgilentHCC18柱(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇水(体积比70∶30),柱温为室温,流速为1.0mL·min-1,紫外检测波长为281nm。结果炔雌醇与卵磷脂、溶剂峰能有效分离,炔雌醇在2~20μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9997,n=10),回收率在98.0%~102.0%之间。结论所建立的方法
2、简便、准确、灵敏度高、方法可靠,可作为炔雌醇脂质体的含量及包封率的质量控制方法。【关键词】反相高效液相色谱法;炔雌醇脂质体;含量测定;包封率 Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfortheanalysisofethinylestradiolcontentandentrapmentefficiencyofethinylestradiolliposomes.MethodSamplesn(4.6mm×250mm,5μm)usingmethanolob
3、ilephase.ThefloL·min-1anddetection.ResultsEthinylestradiolhadagoodlinearityovertherangeof2~20μg·mL-1(r=0.9997,n=10),theaveragerecoveryethodissimple,accurateandsensitiveforthequalitycontroloftheliposomes. Keyes;ethinylestradiol;entrapmentefficiency
4、 炔雌醇又名乙炔雌二醇,为3羟基19去甲17α孕甾1,3,5(10)三烯20炔17醇。化学结构式为〔1〕: 炔雌醇作为雌激素类药,其对下丘脑和垂体有正、负反馈作用,小剂量时可刺激促性腺素分泌,其活性是雌二醇的7~8倍,己烯雌酚的20倍,临床多用于月经紊乱,如闭经、月经过少、功能性子宫出血、绝经期综合征、子宫发育不全、前列腺癌等疾病的治疗,具有疗效确切、价格适中等优点,易被广大妇女所接受。但其亦有许多副反应,如恶心、呕吐、阴道出血、诱发子宫内膜癌等〔2,3〕,因而严重地影
5、响到病人的用药安全。将其制备成脂质体,可以有效地减少给药次数和给药量,提高生物利用度,降低毒副作用。 本文制备了炔雌醇脂质体,并采用反相高效液相色谱法测定炔雌醇脂质体的含量和包封率〔4,5〕。实验结果表明,该方法准确可靠,可作为炔雌醇脂质体质量控制的一个有效手段。 1仪器与试药 illennium色谱工作站;AgilentHCC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;日立U3010/3310紫外可见分光光度计(北京天美公司);Nip370激光散射粒径仪(加拿大SantaB
6、urbara公司),挤压器(加拿大LipexBiomembranes公司)。甲醇(色谱纯,SKChemicals);炔雌醇原料药(上海医药集团有限公司);精制蛋黄卵磷脂eggphosphatidylcholine(西安力邦制药有限公司,质量分数98%)。 2方法与结果 2.1脂质体的制备采用薄膜法制备炔雌醇脂质体〔6-8〕:按药物含量15%~30%(摩尔比)称取炔雌醇原料药和蛋黄卵磷脂,将其溶于适量甲醇氯仿(体积比1∶2)中,漩涡混合均匀后,50℃下氮气吹干,再用真空泵将剩余有机溶剂抽干。
7、加入磷酸盐缓冲液漩涡混合,高速剪切1~2h,用脂质体挤压器将其依次经过400、200、100nm聚碳酸盐滤膜挤压,即得。获得的脂质体的平均粒径都在110nm左右,电镜观察,呈现均匀的圆球状。 2.2色谱条件 色谱柱:AgilentHCC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇水(体积比70∶30);柱温:室温;流速为1mL·min-1;紫外检测波长为281nm;进样量50μL。 2.3干扰试验称取20mg炔雌醇置10mL容量瓶中,加入甲醇水(体积比70∶30)溶解并稀释
8、至刻度,得炔雌醇对照品溶液。分别精密吸取空白脂质体及炔雌醇脂质体各0.2mL,用甲醇水(体积比70∶30)稀释至2.0mL破乳,振荡混匀,分别得到空白脂质体溶液和脂质体炔雌醇溶液。将上面制备的3种溶液过0.22μm有机滤膜,各取50μL进样分析,得色谱图。结果表明,卵磷脂和炔雌醇的保留时间相距很大,卵磷脂对炔雌醇的测定无干扰。炔雌醇对照品和炔雌醇脂质体的峰面积基本相同,证明卵磷脂没有吸附炔雌醇,也没有改变炔雌醇的性质和结构,见图1。 2.4线性关系考察取炔雌醇对照品溶液,按上述色谱条件,分别
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