HPLC法测定炔雌醇脂质体的含量及包封率.doc

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1、HPLC法测定炔雌醇脂质体的含量及包封率作者：陈云，陈涛，卢婷利，胡惠静，马玉樊【摘要】目的建立测定炔雌醇脂质体的含量及包封率的方法。方法采用HPLC法,以AgilentHCC18柱(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱，流动相为甲醇水(体积比70∶30)，柱温为室温，流速为1.0mL·min-1，紫外检测波长为281nm。结果炔雌醇与卵磷脂、溶剂峰能有效分离，炔雌醇在2～20μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9997,n=10），回收率在98.0%～102.0%之间。结论所建立的方法简便、准确、灵敏度高、方法可靠，可作为炔雌醇脂质体的含量及包封率的质量控制方法。

2、【关键词】反相高效液相色谱法；炔雌醇脂质体；含量测定；包封率　　Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfortheanalysisofethinylestradiolcontentandentrapmentefficiencyofethinylestradiolliposomes.MethodSampleswereanalyzedonanAgilentHCC18column（4.6mm×250mm，5μm）usingmethanolwater（70∶30）asmobilephase.Theflowratewas1.0mL·min-1

3、anddetectionwavelength281nm.ResultsEthinylestradiolhadagoodlinearityovertherangeof2～20μg·mL-1(r=0.9997,n=10),theaveragerecoverywasbetween98.0%and102.0%.ConclusionThismethodissimple,accurateandsensitiveforthequalitycontroloftheliposomes.　　Keywords:HPLC;ethinylestradiolliposomes;ethinylestradio

4、l;entrapmentefficiency　　　　炔雌醇又名乙炔雌二醇，为3羟基19去甲17α孕甾1，3，5（10）三烯20炔17醇。化学结构式为［1］：　　炔雌醇作为雌激素类药，其对下丘脑和垂体有正、负反馈作用，小剂量时可刺激促性腺素分泌，其活性是雌二醇的7～8倍，己烯雌酚的20倍，临床多用于月经紊乱，如闭经、月经过少、功能性子宫出血、绝经期综合征、子宫发育不全、前列腺癌等疾病的治疗，具有疗效确切、价格适中等优点，易被广大妇女所接受。但其亦有许多副反应，如恶心、呕吐、阴道出血、诱发子宫内膜癌等［2,3］，因而严重地影响到病人的用药安全。将其制备成脂质体，

5、可以有效地减少给药次数和给药量，提高生物利用度，降低毒副作用。　　　　本文制备了炔雌醇脂质体，并采用反相高效液相色谱法测定炔雌醇脂质体的含量和包封率［4,5］。实验结果表明，该方法准确可靠，可作为炔雌醇脂质体质量控制的一个有效手段。4　　1仪器与试药　　　　Waters2695高效液相色谱仪，Waters2996紫外检测器，Waters717自动进样器，WatersMillennium色谱工作站；AgilentHCC18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱；日立U3010/3310紫外可见分光光度计(北京天美公司)；Nicomp370激光散射粒径仪（加拿大SantaBur

6、bara公司），挤压器(加拿大LipexBiomembranes公司)。甲醇(色谱纯，SKChemicals)；炔雌醇原料药（上海医药集团有限公司）；精制蛋黄卵磷脂eggphosphatidylcholine(西安力邦制药有限公司，质量分数98%)。　　2方法与结果　　2.1脂质体的制备采用薄膜法制备炔雌醇脂质体［6-8］：按药物含量15%～30%（摩尔比）称取炔雌醇原料药和蛋黄卵磷脂，将其溶于适量甲醇氯仿（体积比1∶2）中，漩涡混合均匀后，50℃下氮气吹干，再用真空泵将剩余有机溶剂抽干。加入磷酸盐缓冲液漩涡混合，高速剪切1～2h，用脂质体挤压器将其依次经过400、200、10

7、0nm聚碳酸盐滤膜挤压，即得。获得的脂质体的平均粒径都在110nm左右，电镜观察，呈现均匀的圆球状。　　2.2色谱条件　　色谱柱：AgilentHCC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：甲醇水(体积比70∶30)；柱温：室温；流速为1mL·min-1；紫外检测波长为281nm；进样量50μL。　　2.3干扰试验称取20mg炔雌醇置10mL容量瓶中，加入甲醇水（体积比70∶30）溶解并稀释至刻度，得炔雌醇对照品溶液。分别精密吸取空白脂质体及炔雌醇脂质体各0.2m