衍生毛细管气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量-论文.pdf

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1、中国生物制品学杂志2014年8月第27卷第8期ChinJBiologicalsAugust2014，Vo1．27No．8·1097··技术方法·衍生毛细管气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量纪宏，马迅，祁进，刘晶，王威，裴旭敏北京市药品检验所，北京100035摘要：目的采用衍生毛细管气相色谱法测定流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量，并进行验证。方法应用2，4一二硝基苯肼(2，4．dinitrophenylhydrazine，DNPH)衍生流感病毒裂解疫苗中的游离甲醛，对其衍生化条件进行优化后，采用毛细管气相色谱法直接进样测定。色谱条件：色谱柱为HP．5毛细管色谱柱，初

2、始温度为150℃，保持1min，以20℃／min的速率升温至250℃，保持10rain；检测器为电子捕获检测器，温度为350℃，尾吹60ml／min；进样口温度为300oC，隔垫吹扫3ml／min，分流比50：1；载气为氮气，流量为2．5ml／min；进样量11。确定建立的方法的检测限和定量限，进行线性、专属性、准确度、精密度及稳定性验证，并用建立的方法检测2个企业共11批样品中游离甲醛含量。结果确定的最佳衍生化条件为：量取对照品溶液和供试品溶液各1ml，分别置15ml离心管中，加入DNPH盐酸溶液1ml，涡旋1min；超声5min；60衍生45min；冰浴冷却，加入环己

3、烷2ml，涡旋萃取1min；静置分层，收集上层液1ml，注入气相色谱仪进行检测。该方法的最低检测限为0．1I-Lg／ml，定量限为0．2txg／ml，游离甲醛含量在1—30Ixg／ml范围内，与峰面积呈良好的线性关系(r2=0．9998)；该色谱分离条件对甲醛的衍生物甲醛2，4一二硝基苯腙有较好的专属性；3个不同浓度样品平均加样回收率为107％，相对标准偏差(relativestandarddeviation，RSD)为2．11％；对照品溶液连续进样6次的峰面积平均值为40652．8，RSD为0．004％；甲醛衍生物溶液冻存7h内的峰面积平均值为40257．35，RSD为

4、1．57％。11批流感病毒裂解疫苗的游离甲醛含量均符合《中国药典》三部(2010版)规定，均不高于50~g／ml。结论建立了衍生毛细管气相色谱法检测流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量，该方法操作简单，精密度、稳定性、准确度好，专属性强，可用于流感病毒裂解疫苗中游离甲醛含量的测定。关键词：流感病毒；疫苗；甲醛；毛细管气相色谱法；2，4一二硝基苯肼；衍生物中图分类号：R373．1+30657．7+1文献标识码：A文章编号：1004—5503(2014)08—1097-06Determination0ffreeformaldehydecontentininfluenzaviruss

5、plitvaccinebyderivatizationcapillarygaschromatographyJIHong，MAXun，QIJin，LIUJing，WANGWei，PEIXu-minBeijingInstituteforDrugControl，Beijing100035，ChinaCorrespondingauthor：JIHong，E—mail：jihong@bidc．org．cnAbstract：0bjecfiveTodeterminethefreeformaldehydecontentininfluenzavirussplitvaccinebyderiv

6、atizationcapillarygaschromatography．MethodsThefreeformMdehydeininfluenzavirussplitvaccinewasderivatizedby2，4一dinitmphenylhydrazine(DNPH)and，afteroptimizationofconditionforderivatizaton，determinedbycapillarygaschro—matographywithdirectinjection．HP一5capillarychromatographiccolumnwasusedatan

7、originaltemperatureof150oCwhichwasmaintainedfor1minandincreasedto250oCatarateof20℃／minandfurthermaintainedfor10min．Electroncapturedetectorwasusedatatemperatureof350℃andatailblowingof60ml／min．Thetemperatureofinjectionportwas350℃．whiletherateofseptumpurgeflowwas3ml／mi