不同体积浓度胎牛血清对大鼠髓核间充质干细胞生物学特性的影响-论文.pdf

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1、中国现代医药杂志2014年4月第16卷第4期MMJC，Apr2014，Vol16，No．4不同体积浓度胎牛血清对大鼠髓核间充质干细胞生物学特性的影响宋亮张宁关晓明陈辉马迅【摘要】目的研究大鼠髓核间充质干细胞(NPMSCs)体外培养的最佳血清体积浓度并探讨椎间盘退变的机制。方法用胶原酶、胰酶序贯消化法从sD大鼠腰部和尾部的椎问盘组织中提取NPMSCs，并进行体外培养，将其传代。①利用流式细胞仪对第3代传代NPMSCs细胞表型CD29、CD34、CD24、CD90、CD105进行鉴定；②利用普通PCR鉴定体外

2、培养的NPMSCs细胞基因Sox2、Nanog的表达；③在37℃、21％O：、5％CO的细胞培养箱中用成骨、成软骨、成脂培养液诱导培养第3代传代NPMSCs，2周以后，用染色剂对其染色，观察其成脂、成骨、成软骨能力。④在37oC、21％O：、5％CO：的细胞培养箱中用不同血清体积浓度(0％、5％、10％、20％、30％)的DMEM—F12血清培养液培养第3代传代NPMSCs，72h后利用CCK一8法检测细胞的增殖，并采用RT—PCR检测细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9的mRNA表达，借助流式细胞仪对细胞进

3、行细胞凋亡的检测。结果①大鼠NPMSCs的成骨、成软骨能力强，成脂能力较差，且其细胞表面高度表达CD29、CD90、CD105，低度表达CD24、CD34，细胞基因Sox2、Nanog高度表达。②随着培养液血清体积浓度增加，OD值增大，NPM．SCs的凋亡率降低，细胞蛋白多糖、Ⅱ型胶原、SOX9基因的mRNA表达增加。结论①大鼠NPMSCs具有间充质干细胞特性；②细胞外营养影响大鼠NPMSCs的增殖、分泌、凋亡。【关键词】椎间盘退变髓核间充质干细胞营养增殖凋亡Efectonbiologicalcharac

4、teristicsofratnucleuspulposusmesenchymalstemcellunderdiferentconcentrationfetalbovineserulnngLiang，ZhangⅣ，GuanXiaoming，eta1．ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheoptimumvolumeconcentrationofse131mforthecultureoftheratnucl

5、eusmes—enchymalstemcells(NPMSCs)invitroandthemechanismofintervertebraldiscdegeneration．MethodsNPMSCswasiso-latedandcuhuredfromthelumbarandcaudaloftheSDratsbyCollagenase，trypsinsequentialdigestionmethod，andthentheywereculturedsubcuhuredinvitro．①Flowcytomet

6、rywasusedtoidenti~thecellphenotypeCD29，CD34，CD24，CD90，CD105ofthethirdgenerationNPMSCs．②TheexpressionofSox2，NanogwereassessedbyPCR．(ThethirdgenerationNPMSCswereinducedandculturedbyosteogenesis，chondroblastomasandlipoblastcultureinincubatortll37℃，21％O2，5％CO

7、2condition．After2weeks，dyedthemandobservedtheabilityofosteoporosis，chondroblastomasandlipoblast．④Culturedthethirdgenera—tionNPMSCswithdiferentvolumeconcentrationsoftheDMEM-F12serum(0％，5％，10％，20％，30％)underconditionof37~C，21％02，5％C02for72hours．Thecellprolif

8、erationwasdetectedbyCCK-8methodindiferentgroups，andtheproteogly-canexpressionofthemRNAofSOX9，collagenII，wereassessedbyRT-PCR，andfloweytometrywasusedtodetectapoptosis．Results④TheosteogenicandcartilageabilityoftheratN