不同胶原支架对髓核间充质干细胞分化的影响.pdf

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1、中国脊柱脊髓杂志2015年第25卷第6期ChineseJournalof印ineandspinalCord，2015，Vo1．25，No．6541不同胶原支架对髓核间充质干细胞分化的影响王瑾，陈其昕，陶轶卿，李方财(1浙江大学医学院附属第二医院骨科310009浙江省杭州市；2浙江省立同德医院骨科310009浙江省杭州市)【摘要】目的：比较不同胶原支架中髓核问充质干细胞(NPMSCs)的细胞存活、增殖能力和分化相关基因及蛋白表达等方面的差异。方法：在体外构建I型、I／Ⅱ型混合和Ⅱ型胶原支架，观察其显微结构、孑L隙率及降解特性

2、。从健康雄性大鼠尾椎提取NPMSCs，分别采用细胞微球、I型胶原、I／Ⅱ型混合胶原、Ⅱ型胶原支架培养，其中细胞微球作为对照。通过乳酸脱氢酶(LDH)检测材料生物毒性，CCK一8测定细胞增殖，实时定量PCR和WesternBlot测定SOX9、聚集蛋白聚糖、I型胶原和Ⅱ型胶原的基因和蛋白表达水平，阿尔新蓝组织学染色检测硫酸蛋白聚糖的表达。结果：I型、I／I【型混合和Ⅱ型胶原支架孔隙率均为90％以上，构建21d后的降解率分别为(10．30~0．66)％、(9．87±o．71)％和(10．40±o．53)％。培养后7d细胞LDH

3、检测结果I型、I，Ⅱ型混合和Ⅱ型胶原支架组分别为12．24~0．65、12。13~1．03、12．67~1．15，与对照组12．50~1．32比较无显著性差异(尸>0．05)。胶原支架中培养5d及7d的细胞CCK一8检测结果(I型胶原组为0．67~0．04、1．20~0．05，I／Ⅱ型混合胶原组为0．62~0．05、1．20~0．07，II型胶原组为0．69~0．02、1．34~0．04)明显高于对照组(0．53~0．03，1．02~0．02)(P<0．05)。培养21d后。三种胶原支架组与对照组比较，SOX9、I型胶原、

4、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的基因表达均显著上升(P<0．05)，其中Ⅱ型胶原支架组上述基因表达量最高，与l型及I／Ⅱ型混合胶原支架组有显著性差异(P<0．O5)；与对照组比较，I型胶原支架组中仅I型胶原及聚集蛋白聚糖的蛋白表达上升(P

5、论：I型胶原、I／Ⅱ型混合胶原、Ⅱ型胶原支架均促进NPMSC的分化，而Ⅱ型胶原支架促进NPMSC成髓核细胞分化作用尤为显著。Ⅱ型胶原是髓核组织工程学的理想生物支架材料。【关键词】椎间盘；髓核组织工程学；II型胶原；细胞分化doi：10．3969~．issn，1004—406X．2015．06．11中图分类号：R318．17文献标识码：A文章编号：1004—406X(2015)一06—0541—08Efectofdiferenttypeofcollagenscafoldfornucleuspulposusmesenehyma

6、lstemcelldiferentiation／WANGJin，CHENQixin，TAOYiqing，etal／／ChineseJournalofSpineandSpinalCord，2015，25(6)：541-548【AbstractlObjectives：Toinvestigatethecellviability，proliferationanddifferentiation-relatedgeneandpro—teinexpressionofnucleuspulposusmesenchymalstemcells(

7、NPMSCs)indifferenttypesofcollagenscaffolds．Methods：TypeI，typeI／ⅡandtypeIIcollagenscaffoldswereformedinvitro，andmicrostructure，porosityanddegradabilityweredetected．NPMSCsisolatedfromcoccygealve~ebraofhealthymaleratswerecuhuredasmicromassorintypeIcollagen(COL—I)，typ

8、eI／11collagen(COL-I／1I)，typeIIcollagenscaffold(COL一Ⅱ)，andmicromassservedascontro1．Cytotoxicityandcellproliferationweredetectedbylactatedehydrogenase(LDH