糖类抗原19-9单抗制备及DAS-ELISA的建立-论文.pdf

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1、中国免疫学杂志2014年第3O卷doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2014．08．018糖类抗原19．9单抗制备及DAS．ELISA的建立①王云龙翟晋豫王继创②程蕾②李玉林②葛新杰②毛烈②(河南师范大学生命科学学院，新乡453007)中图分类号R446．6文献标志码A文章编号1000-484X(2014)08-1088-05[摘要]目的：为制备糖类抗原199(Carbohydrateantigen19-9，CA19—9)特异性单克隆抗体。方法：以免疫后小鼠血清效价及其IC50值确定融合用小鼠，融

2、合、筛选获得阳性杂交瘤细胞株。制备、收集并纯化腹水抗体，紫外分光光度法测定抗体浓度；辣根过氧化物酶标记抗体后，筛选配对抗体建立DAS—ELISA检测方法，并与国外检测试剂盒进行对比验证检测性能。结果：细胞融合后获得3株单抗细胞株(zJY1-2C8、ZJY2-7F10、ZJY3—1G9)，筛选确定ZJY3—1G9作为包被抗体、ZJY2-7F10作为酶标抗体，成功建立DAS．ELISA检测方法，最低检测限为26．4U／ml。线性范围为30～300U／ml。通过检测病患血清33份，证实与国外试剂盒检测的相关系数r=0．950

3、4。结论：所制备的单抗可用于CA19-9试剂盒的研制。[关键词]CA19—9；单克隆抗体；DAS—ELISAPreparationagainstcarbohydrateantigen19-9monoclonalantibodiesandestab·lishment0fDAS．ELISAWANGYun一凡g，ZHAIfin—Yu，WANGJi—Chuang，CHENGLei，LIYu—Lin，GEXin—Jie，MAOLie．CollegeofLifeScience．HenanNormafUniversity．Xinxi

4、ang453007，China[Abstract]Objective：Topreparemonoclonalantibodyofcarbohydrateantigen19-9(CA19-9)．Methods：BasedonthetitertestresultsofmouseascitesanditsIC50values，themousethatprepareforfusionwasidentified．Positivemonoclonalcellstrainswereestablishedbycellfusingand

5、screening．Monoclonalantibodyfromasciteswasproducedbyperitonealinjectionmonoclonalcell，andthenpurifiedbyoctoicacid—ammoniumsulfateprecipitationmethod．AfterdeterminetheproteinconcentrationsbyUV—spectrophotometry，themonoclonalantibodyagainstCA19-9waslabelledwithhor

6、seradishperoxidase．Basedonantibodypairingtest，DAS—ELISAmethodwasestablished．Tocomparedwithabroadkit，analyzingperformanceofthismethod．Results：Threestrainsofmonoclonalantibodywereobtained．AndtheoptimalworkingconcentrationsofmAb(ZJY3—1G9)，ascoatedantibody，McAb(zjY2

7、—7FlO)，asHRP-IgG，wereassured．Limitofdetectionwas26．4U／m1．Linearrangewas30—300U／m1．BydetectingpatientswithselTIm33，confirmedthecorrelationcoeffieientofr=0．9504，comparedwithabroadkitthatmeasuresimultaneously．Conclusion：MonoclonalantibodypreparedforCA19-9canbeusedt

8、odevelopakit．[Keywords]CA19-9；Monoclonalantibody；DAS—ELISA1979年Koprowski等¨以结肠癌细胞株良好的特异性及敏感性，针对胰腺癌相关检测阳性SW1116作为免疫原，获得了多种特异性的单克隆率可以达到80％。因此，建立CA19-9的检测对抗体。其中经单克隆抗体ii16