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《环孢霉素A合成抗原的单抗制备技术探讨.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、四川大学学报(医学版D2;(D:571~57JSichlanUniV(MedSciEdiD环孢霉素A合成抗原的单抗制备技术探讨%陈米娜1范昕建1A魏大鹏2吴琼英3冯萍1吕晓菊11.四川大学华西医院传染科(成都610041D;2.四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室;3.四川大学化工学院[摘要)目的研究利用自制的合成抗原制备环孢霉素A单克隆抗体的方法O方法利用光化学反应将环孢霉素A与聚-L-赖氨酸偶联为合成抗原,免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,经反复筛选亚克隆获得抗CSA抗体的杂交瘤细胞株,以间接ELISA法进
2、行抗体鉴定O结果获得4株分泌抗CSA抗体的杂交瘤细胞株,其中2株分泌的抗体效价高,有一定特异性O结论该抗原合成和免疫的方法切实可行,但单克隆抗体制备及保存方法有待进一步改进O[关键词)环孢霉素A聚-L-赖氨酸合成抗原单克隆抗体[中图分类号)R392.116%OnPreparationtheMonoclonalAntibodyAgainstSyntheticAntigenofCyclosporineAChenMino,Fon%Xinjion,Weidopeng,Wuoiongying,Fengping,LUXiooju.Depcrtmentoffnfectzous
3、Dzsecse,WestchzncHospztc,SzchucnUnzUerszty,Chengdu610041,China[Abstract)ObjectiVeToStudythemethodSforpreparingthemonoclonalantibodyagainStSyntheticantigenofcycloSporineA.MethodsTheSeincludeduSingphotochemicalreactiontocouplecycloSporineAWithpoly-L-lySineaSSyntheticantigen,immunizingB
4、ALB/cmice,fuSingSpleencellSandSP2/0cellS.ThenhybridomacellSWererepeatedlyScreenedandSubcloned.ThemonoclonalantibodieSWereidentifiedbyindirectELISA.ReslltsFourhybridomacellSinSecretinganti-cycloSporineAmonoclonalantibodieSWereobtained.OnlytWoShoWedhightiterandSomeSpecificity.Concllsio
5、nsThemethodSofantigenSyntheSiSandimmunizationWerepracticable.ButthemethodSofantibodypreparationandpreServationneedtobeimproved.[KeyWords)CycloSporineAPoly-L-lySineSyntheticantigenMonoclonalantibody环孢霉素A(CSAD是新型的免疫调节剂,它不1.1.2SP2/0细胞由我校华西基础医学与法医仅广泛应用于各种器官和组织移植,还应用于一些学院免疫学教研室提供O自身免疫性疾病[
6、1]O但其治疗浓度范围窄,药代动力1.1.主要试剂环孢霉素A(CSA,由杭州中美学个体差异较大,其血药浓度与疗效及毒性密切相华东制药有限公司提供D,聚-L-赖氨酸(PL,由美国关,且其毒性反应与排异反应难以区别,故监测Sigma公司提供D,HAT(次黄嘌呤H~氨基喋呤A~CSA浓度对于指导临床合理用药具有重要的意胸腺嘧啶核苷T由美国Sigma公司提供D,HRP标义[2]O目前国内主要用高效液相色谱法~放射免疫分记山羊抗小鼠IgG抗体(由美国Sigma公司提供DO析法~荧光偏振免疫分析法对其进行检测,但都有其1.2方法相应的缺点及应用的局限性,而利用单克隆抗体进1
7、.2.1抗原合成将CSA与PL进行交联,先利用行检测具有相对明显的优势[3]光化学反应将CSA与4-苯甲酰苯甲酸(BBaD相连O目前尚无ELISA检测CSA的药盒O本研究就自制合成抗原免疫从而在CSA分子上引入羧基,再利用羧基与氨基的反应将它与PL偶连成为大分子抗原物质OBALB/c小鼠制备CSA抗体进行了初步探讨O1.2.2动物免疫对5只8~10周龄雌性清洁级1材料与方法纯种BALB/c小鼠进行免疫O初次免疫:弗氏不完全佐剂充分乳化后,每只小鼠背部皮下或皮内多点1.1材料注射共0.2ml(约含CSA50HgDO3周后第二次免1.1.1动物8~10周龄雌性清洁级
8、纯种BALB/疫,方法同
