氨苄青霉素人工抗原的合成及单克隆抗体的制备

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1、畜牧与兽医2014年第46卷第12期·15·氨苄青霉素人工抗原的合成及单克隆抗体的制备12*221史蕾，程华，闫静辉，吴萌，刘敬泽(1．河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024;2．河北省科学院生物研究所，河北石家庄050081)摘要:用酸酐法将氨苄青霉素(Ampicillin，AMP)偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和匙孔血蓝蛋白(KeyholeLimpetHemocyanin，KLH)，合成了免疫抗原AMP－KLH和检测抗原AMP－BSA，并进行了鉴定;用免疫抗原AMP－KLH免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术筛选出了3株分65泌抗AMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株。特性

2、分析显示，单克隆抗体2C3、4E5和4C7的腹水效价分别为1∶1.02×10、1∶5.12×10和1∶5.125×10，其中2C3的AMP半数抑制浓度(IC50)为9.3ng/mL，与青霉素类抗生素有明显交叉反应，其他类别抗生素的交叉反应率均小于0.01%。关键词:氨苄青霉素;人工抗原;单克隆抗体;特性鉴定中图分类号:S859.84文献标志码:A文章编号:0529－5130(2014)12－0015－04Synthesisofampicillinartificialantigenandpreparationofanti-ampicillinmonoclonalantibodies12*

3、221SHILei，CHENGHua，YANJinghui，WUMeng，LIUJingze(1．CollegeofLifeScience，HebeiNormalUniversity，Shijiazhuang050024，China;2．InstituteofBiology，HebeiAcademyofSciences，Shijiazhuang050081，China)Abstract:Ampicillin(Amp)wasconjugatedtocarrier-proteinbovineserumalbumin(BSA)orKeyholeLimpetHemocyanin(KLH)tos

4、ynthesizetheimmunogenKLH－AmpandthedetectionantigenBSA－Ampbyacidanhydridemethod．KLH－AmpwasusedtoimmunizeBALB/cmice，andthreehybridomacelllinessecretingmonoclonalantibodies(mAbs)againstAmpweredevelopedusinghybridomatech-655nology．Thetitersoftheasciticfluid(2C3，4E5and4C7)weredeterminedas1∶1.02×10，1∶

5、5.12×10and1∶5.12×10inELISA，andfor2C3，thehalfmaximalinhibitoryconcentration(IC50)ofAmpwere9.3ng/mLintheinhibitiveELISA．TheAmpmAbsshowedthesignificantcross-reactivitytothepenicillinantibioticslikecarbenicillin，penicillinGandamoxicillin，whereasnoobviouscross-reactivitytootherantibioticwasfound．Keyw

6、ords:ampicillin;artificialantigen;monoclonalantibody;characterization氨苄青霉素(Ampicillin，AMP)是一种重要的物学检测法。其中HPLC检测方法灵敏、高效，是目β－内酰胺类抗生素，因其高效、低毒的特点而被广前国际上通用的方法，但需要专门的技术人员操作，［1］泛应用。随着青霉素类药物的广泛应用，其在动并且前处理复杂、检测费用高，因此不适用于大量样［2］物性食品中的残留问题日益突出，不仅影响人体正常品的快速筛选和检测。微生物检测法虽操作简便菌群的生长，使细菌产生耐药性，而且还可能会引发但检测灵敏度不够;免疫学检

7、测法具有操作简便、灵严重的过敏反应。因此，各国都对动物性食品中各种敏度高、成本低等特点，适用于大量样品的检测，应［3－4］抗生素的最大残留(MＲL)做出了限量标准。用前景非常广阔。本试验以Amp人工抗原免疫目前检测青霉素类抗生素残留常用的方法主要包小鼠，利用杂交瘤细胞技术获得了高亲和力的抗括免疫学检测法、高效液相色谱法(HPLC)和微生Amp单克隆抗体，并测定其与β－内酰胺类抗生素的交叉反应谱，以期为Amp免疫检测提供关键检测收稿日期:2014