莱克多巴胺人工抗原的制备及鉴定

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1、AthesissubmittedtoZhengzllouUnivers时forthede孕eeofMasterProductionandIdentmcationofRactopamilleArtificialAntigenByW．eiZhengSupervisor：Pro￡GaipingZhang工．I’一■-，Subject：CellBiologySch001ofLifeScienceApril2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的

2、内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：％乍＼日期：芝D／，舻年多月f日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保

3、存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。靴做储：‰％嗍M州月／日摘要莱克多巴胺(R船top锄iIle，RAC)是一种苯酚胺类B2肾上腺素受体激动剂，与“瘦肉精”盐酸克伦特罗一样具有促进营养再分配和生长的作用，因此被用作新型添加剂促进机体生长。由于莱克多巴胺具有在动物体内蓄积残留的特性，食用莱克多巴胺添加剂饲养的动物会引起人们不同程度的中毒反应，具体表现为骨骼肌收缩增加，引起肌肉震颤。在我国已经禁止其生产

4、和销售，但是非法使用的现象仍时有发生。目前，越来越多的分析方法被用于检测RAC残留，例如利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对RAC残留进行初步筛查，再通过质谱或者色谱进行确认。与色谱法、质谱法、生物传感器法等药物残留检测方法相比，免疫学分析方法不需要昂贵的仪器，具有操作简单和可以进行高通量检测的优点，在RAC残留检测中发展迅速并己得到广泛的应用。本研究通过三种不同的制备方法获得莱克多巴胺人工抗原。其中采用1，4．丁二醚法(LiIll(er法)制备RAC人工抗原，并把此方法制备的RAC．0VA作为包被原；此外，利

5、用混合酸酐法制备RAC人工抗原，最终获得偶联比分别为8：1，17：1，23：1的RAC．BSA人工抗原；另外，本研究首次利用NIN．羰基二咪唑法一步制备I认C人工抗原，采用不同的溶剂得到浓度和偶联比不同的RAC．BSA人工抗原。采用物理学的方法(紫外光谱扫描和SDS．PAGE凝胶电泳)以及免疫学的方法(间接ELISA)鉴定人工抗原是否偶联成功。本研究利用三种不同制备方案成功获得RAC人工抗原，并首次利用NtN．羰基二咪唑法成功制备了RAC人工抗原，并获得效价约为1：6400的抗血清。为制各高特异性抗RAC单克隆抗

6、体奠定了基础。关键词：莱克多巴胺；人工抗原；偶联比；NfN．羰基二咪唑Abs缸act__————————————————————————————————————————————————————一AbStraCtClaSsedaSphenolicamille，ractopamme(ractopamille，RAC)isap2adrene玛icreceptoragoIlistsw池e＆ctsofnutritionredi嘶b埘onandgrowcllpromonon，si血1砒vto也e‘‘le拼’cl枞erol，w

7、11ichisuSedasadditiVet0mreaSeleaIlmusclegrowtllaIldproteillaccretion．However’廿1eresiduesofRACi11撕mala11dmeserioushanntopeople’shealm，w11ichmayposeapotentialriskforcons眦erhealm，resultinginsomeha彻觚e虢ctsonhumaIlhealmincludingheadache，dizziness，chestdis仃ess，heaIt

8、palpitatioIls，aJldlimbn吼bness．InC蛐阻，theprod嘶on趾dsaleofractopaⅡ1inehaSbaIled、枇lemeillegaluseofraCtopiIIliIleisoccaSio砌lyreponed．Currently，morei删loglcalanalyslsmetllodsareusedt0detectresidu