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1、第30卷第2期食品与生物技术学报Vol.30No.22011年3月JournalofFoodScienceandBiotechnologyMar.2011文章编号:1673-1689(2011)02-0316-05强力霉素人工抗原的合成与抗体制备1121甘金华,邓薇,李进平,艾晓辉(1.中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北荆州434000;2.武汉纺织大学环境与城建学院,湖北武汉430073)摘要:采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白BSA连接制备强力霉素-牛血清白蛋白(BSA-DC)人工免疫抗原,
2、并用同样方法将强力霉素与载体蛋白OVA连接制备人强力霉素-卵清白蛋白(OVA-DC)人工包被抗原。经紫外扫描分析和动物免疫试验证实:强力霉素人工抗6原合成成功,强力霉素与BSA的结合比为31,经动物免疫试验所得抗血清效价为2.04810,完全能够满足强力霉素残留的ELISA检测要求。关键词:强力霉素;人工抗原;抗体;合成;制备中图分类号:S81617文献标识码:AArtificialAntigenSynthesisandAntibodyPreparationofDoxycycline1121GANJin-hua,DENGWei,LIJin-ping
3、,AIXiao-hui(1.YangtzeRiverFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Jingzhou434000,China;2.EnvironmentandUrbanConstruction,WuhanTextileUniversity,Wuhan430073,China)Abstract:Inthisstudy,theimprovedtwo-stepcarbodiimidemethodwasusedtoconnectedoxycyclinehaptenwithcarr
4、ierproteinBSA,anddoxycyclinewiththecarrierproteinOVAtopreparetheartificialantigenofdoxycycline(BSA-DC)andcoatingantigen(OVA-DC),respectively.UVscanninganalysisandanimalimmunetestsconfirmthesuccessinpreparationofartificialantigen,andthecombinationratioofdoxycyclineandBSAis31bycalcu
5、lating.Atthe6sametime,theresultsshowedthathightitersof204810ant-iDCserumwereproducedbyBSA-DCimmunizedrabbit.ItprovidedanecessaryconditionforELISAdetectingdoxycyclineresidues.Keywords:doxycycline,artificialantigen,antibody,synthesis,preparation强力霉素(doxycycline,DC)是半合成的四环它可以特异性地与
6、细菌核糖体的30亚基结合,进素类抗菌药,为快速抑菌剂,其结构式见图1。强力而阻止了携带有氨基酸的tRNA与mRNA-核糖体霉素的抑菌机制主要是抑制微生物蛋白质的合成,化合物的结合,从而阻止肽链延伸和细菌蛋白质合收稿日期:2010-04-30基金项目:农业部公益性行业专项项目(200803013)。作者简介:甘金华(1979-),女,湖北安陆人,理学硕士,助理研究员,主要从事鱼类药理、病理学及药物残留检测方面的研究。Email:rabbit_gjh@sina.com第2期甘金华等:强力霉素人工抗原的合成与抗体制备317[1]成。其次四环素类还可引起细
7、胞膜通透性改变,使胞内的核苷酸和其他重要成分外漏,从而抑制[2]DNA复制。与天然四环素类药物如金霉素(au-reomycin,AM)、土霉素(oxytetracycline,OT)及四环素(tetracycline,TC)相比,强力霉素具有抗菌活性和组织穿透力更强、体内分布广、生物利用度高、半衰期较长等优点,现已广泛应用于水产养殖中多[3]种感染性疾病的预防和治疗或是用作促生长剂。其不良反应有:1)如果长期使用该药物会引起动物消化机能障碍的发生。长期大量口服或静脉给予大剂量该药物时会损害肝脏,引起肝脂量增高及细小脂肪变性,因药物沉积于肝细胞线粒体,干扰脂蛋
8、白的合成和甘油三酯的输出,引起肝脏的脂肪变[4]性甚
