强力霉素广谱单克隆抗体的制备及应用

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1、分类号：S8斡．84单位代码：!QQ墨鱼学号：2Q!Q垒鱼!强力霉素广谱单克隆抗体的制备及应用Preparationandapplicationofthegenericmonoclonalantibodyfordoxycycline学位申请人：指导教师：学科专业：学位类别：授予单位：答辩日期：高峰王建平副教授基础兽医学理学硕士河北农业大学二。一三年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不

2、包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盔些盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：尚啐签字日期：为侈年多月弓1日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇堡盔些盘鲎有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盔些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等

3、复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：蔼签字日期：声B年岁月学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：刍媾’／弓1日I新虢瓣签字日期：纠；年电话：邮编：岁月弓1日I摘要四环素类药物是兽医临床常用的一类抗生素，常用的品种有四环素、金霉素、土霉素、强力霉素，主要用于家畜和家禽各种疾病的治疗。随着这些药物的广泛应用，它们在动物性食品中的残留逐渐受到重视。在四环素类抗生素的残留检测方法中，免疫分析法以其特异性高、简单、灵敏、快捷的特点而被广泛应用。本研究采

4、用重氮法在强力霉素(DC)和金霉素(CTC)分子上分别引入对氨基苯乙酸，合成了两种新的半抗原DC．C和CTC．C。用混合酸酐法将半抗原DC．C和载体蛋白偶联，制备了免疫原DC—C—BSA和包被原DC—C—OA。用同样的方法将半抗原CTC．C与载体蛋白偶连，制备了包被原CTC．C．OA。经紫；'I-N定，免疫原DC．C．BSA的偶联比为19：1，包被原DC．C．OA的偶联比为15：1，包被原CTC．C．OA的偶联比为9：1。另外，将强力霉素与载体蛋白偶连，制备了免疫原DC．BSA和包被原DC．OA

5、，偶联比分别为16：1和11：1。用两种免疫原分别免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，最终获得了两株分泌抗强力霉素的单克隆抗体的杂交瘤细胞。将获得的抗体和三种包被原两两组合成六种组合，通过优化筛选，确定了免疫原DC．C．BSA产生的抗体和包被原CTC．C．OA为最佳组合，建立了一种可以同时检测牛肉和牛奶中七种四环素类药物(强力霉素，四环素，金霉素，土霉素，米诺环素，美他环素，地美环素)残的间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)方法。在该方法中，包被抗原最适包被浓度为2．1rtg／m

6、L，单克隆抗体的最适工作浓度为l：10000。该方法对七种四环素类药物的交叉反应率为47％～102％，检测限为1．5-6．9ng／mL。七种药物在空白样品中的添加回收率为75．3‰106．8％，变异系数低于10．9％。因此，该ELISA方法快速、灵敏、方便，满足了四环素类残留检测的要求，适用于大批量样品的快速筛选检测。关键词：四环素类药物；强力霉素；单克隆抗体；酶联免疫吸附法；牛肉；牛奶Preparationandapplicationofthegenericmonoclonalantibody

7、fordoxycyclineCandidate：GaoFengMajor：BasicVeterinaryMedicineAdvisors：WangJianpingAbstractTetracyclinedrugsareaclassofantibioticsthatareusuallyusedasveterinarydrugs．Forexample，tetracycline，chlortetracycline，oxytetracyclineanddoxycyclinearethecommonlyu

8、sedrepresentativesforthetreatmentofvariousdiseasesin1ivestockandpoultry．Asthesedrugsarewidelyused，theirresiduesinthefoodsofanimaloriginbecomeapublicconcern．Amongthedetectionmethodsfortetracyclinesresidues，immunoassayiswidelyusedduetoitsmeritsofhighsp