吩噻嗪类药物广谱单克隆抗体及阿莫西林单链抗体的制备

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文吩噻嗪类药物广谱单克隆抗体及阿莫西林单链抗体的制备学位申请人：高宝龙指导教师：王建平副教授合作导师：刘静学科专业：基础兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二0—五年五月二十七日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农此大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢

2、意。学位论文作者签名：签字円期：y/i年上月^曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年t月^日签字曰期：2办年5月^日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址:邮编:分类号：S859.84单位代码：10086密级：公开学号：2012354吩噻嗪类药物广谱单

3、克隆抗体及阿莫西林单链抗体的制备Preparationofthegenericmonoclonalantibodyforphenothiazinesandthesinglechainfragmentviarableantibogyforamoxycillin学位申请人：高宝龙指导教师：王建平副教授合作导师：刘静学科专业：基础兽医学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二O一五年五月二十七日本研究是由国家自然科学基金项目“兽药重组ScFv抗体的分子识别机制及双特异性ScFv抗体研究（31271869）”、河北省自然科学基金项目“兽药广谱特异性单链抗体研究（C201120402

4、1）”资助摘要随着我国畜牧业的发展，兽药及药物添加剂的使用量呈逐年上升趋势。例如，有不法企业在动物饲料中添加吩噻嗪类药物以减少畜禽活动量达到增重的目的，或在动物运输过程中使用此类药物以减少动物的失重和死亡率。还有许多养殖企业在养殖过程大量使用青霉素类药物以预防或治疗动物的多种细菌性疾病。这些药物的使用会造成其在动物性食品中的药物残留，对公众健康造成潜在的危害。本研究的目的是制备吩噻嗪类药物的单克隆抗体和阿莫西林的单链抗体，为研究免疫检测方法或检测产品提供物质基础。在实验中，首先对2-氯吩噻嗪（ChPZ）进行了分子改造，将其用溴乙酸进行衍生化合成半抗原（ChPZD），然后采用混合酸酐法将

5、ChPZD分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联制成ChPZ的免疫原（ChPZD-BSA）和包被原（ChPZD-OVA）。用ChPZD-BSA免疫BALB/C小鼠，利用间接竞争ELISA法测定血清的效价及特异性。选择血清效价高且对ChPZ有特异性的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞。以间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，采用有限稀释法经过多次筛选得到两株阳性杂交瘤细胞株，采用体内诱生法使小鼠产生腹水，以饱和硫酸铵法和ProteinA亲和层析柱纯化法对抗体进行纯化，最后得到能识别五种吩噻嗪类药物（氯丙嗪、奋乃静、异丙嗪、乙酰丙嗪、氟奋乃静）的广谱单克隆抗体。另一方面

6、，从分泌抗阿莫西林单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，反转录得到单链cDNA，再通过PCR扩增分别得到编码抗体重链（VH）和轻链（VL）的基因片段，然后将VH和VL拼接成单链抗体的基因片段（ScFv）。将ScFv和表达载体PET-32a进行连接后得到重组表达载体，并转化表达菌株BL21(DE3)感受态表达产生融合His标签的阿莫西林单链抗体。本研究制备了吩噻嗪类药物的广谱单克隆抗体和阿莫西林的单链抗体，这两种抗体将对监控养殖业中吩噻嗪类药物和青霉素类药物的非法使用和残留，保障动物源性食品安全有重要意义。关键词：吩噻嗪类药物；2-氯吩噻嗪；单克隆抗体；阿莫西林；单链抗体Preparat

7、ionofthegenericmonoclonalantibodyforphenothiazinesandthesinglechainfragmentvaivableantibodyforamoxycillinCandidate:GaoBaolongMajor:BasicVeterinaryMedicineAdvisors:WangJianpingAbstractWiththedevelopmentofanimalhusbandry,theus