氟喹诺酮类药物广谱单克隆抗体的制备及应用

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1、分类号：墨墨5窆：墨垒密级：公珏单位代码：!QQ墨鱼学号：2QlQ垒鱼2氟喹诺酮类药物广谱单克隆抗体的制备及应用Preparationandapplicationofthegenericmonoclonalantibodyforfluoroquinolonedrugs学位申请人：指导教师：学科专业：学位类别：授予单位：答辩日期：刘彦政王建平副教授基础兽医学农学硕士河北农业大学二。一三年五月二十九日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论

2、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇垦盛些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：吾叮磊孑良签字日期：2形；年f月3／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦盛些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑些壅些盘茎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学

3、位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：专b荔孑友’。导师签名：学位论文作者签名：弓1勿孑及导师签名：签字日期．纠弓年且"签字魄叼；年歹月；／日学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：本研究由河北省科技支撑计划项目(编号12220402D)和河北省自然科学基金项目(编号C2011204021)资助摘要氟喹诺酮类药物是一类化学合成的抗菌药，该类药物具有抗菌谱广，抗菌力强，作用迅速，吸收完全，且毒作用小等特点，因此该类药物广泛应用于人医及兽医临床。但是，随着此类药物的广泛应用，其在动物源性食

4、品中的残留对人类身体健康产生了非常大的危害，引起了广泛的关注。本研究旨在建立一种多残留免疫分析方法对动物源性食品中氟喹诺酮类药物的残留进行检测。本研究对环丙沙星(CIP)和沙拉沙星(SAR)进行了分子改造，在它们分子结构中的哌嗪环上连接一个游离的氨基，合成四种新型半抗原(CIPl、CIP2、SARl、SAR2)。然后，采用戊二醛法将合成的半抗原分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OA)连接，制备四种免疫原和四种包被原，半抗原与载体蛋白的结合比范围在12．17：1之间。以四种免疫原分别免疫Balb／cdx鼠，利用间接ELIS

5、A方法评价不同的包被抗原与抗体组合，经过多次试验，表明环丙沙星的两种免疫原具有较好的免疫特性。选择血清效价最高且有明显抑制作用的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞。通过间接竞争ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，采用有限稀释法经过多次筛选得到两株阳性杂交瘤细胞株。采用小鼠体内诱生法产生腹水，以饱和硫铵法进行纯化，得到单克隆抗体。所得抗体能同时识别环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、沙拉沙星、二氟沙星、达氟沙星、氧氟沙星、马波沙星、培氟沙星、洛美沙星、氨氟沙星和依诺沙星等12种氟喹诺酮类药物。以该抗体为基础，建立起一种检测12种氟

6、喹诺酮类药物的ELISA方法。该法对上述药物的交叉反应率范围为23％．120％，IC50范围为7．6-39．5ng／mL，最低检测限([Clo)范围为1．O-4．5ng／mL。然后，选取8种兽用喹诺酮类药物分别在空白鸡肉中按照50、100ng／g的浓度添加，ELISA方法检测，添加回收率范围为61．5％．82．5％，变异系数为7．5％．15．2％。因此，本方法可以作为一种快速筛选工具用于动物源性食品中氟喹诺类药物的多残留检测，以提高检测效率，保障动物性食品安全。关键词：氟喹诺酮类药物；环丙沙星；沙拉沙星；半抗原；单克隆抗体；E

7、LISA；鸡肉PreparationandapplicationofthegenericmonoclonalantibodyforfluoroquinolonedrugsCandidate：LiuyanzhengMajor：BasicVeterinaryMedicmeAdvisors：WangJianpingAbstractFluoroquinolonedrugsisaclassofsyntheticantibacterialdrugsthathasseveralmerits：broadantimicrobialspectru

8、m，strongantibacterialability,quickaction，compeleteabsorption，andlowtoxicity．Therefore，thisclassofdrugsiswidelyusedinhumanandveterinaryclin