医学毕业论文抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用

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1、抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用姓名：2014年6月25日抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用Preparationandprimaryapplicationofmonoclonalantibodyagainstbenzylpenicillin[Abstract]AIM:Todevelopmonoclonalantibody(mAb)againstbenzylpenicillinandtoestablishaSandwichELISAmethodforrelativequantitativeanalysisof

2、theallergenwhichinducedpenicillinallergycommonlyinclinic.METHODS:Penicillin,asakindofhapten,wasconjugatedwithcarrierproteintoformcompleteantigenandthenwasusedtoimmunizeBALB/cmice.HybridomacellssecrectingmAbagainstpenicillinweredeveloped.Ascitesfromtheimmuniz

3、edmicewerepurifiedbycaprylicacidammoniumsulfateprecipitation.ThespecificityofthepurifiedantibodieswasdetectedandthesuitableantibodieswereusedforestablishingSandwichELISA.RESULTS:NinehybridomacellsstablysecrectingmAbwerepreparedthroughcellfusion，screeningandc

4、loning,andfiveofthesepurifiedmAbhadrelativehighaffinity.ThedoubleantibodySandwichELISAforrelativequantitativeanalysisofbenzylpenicilloylproteinwasestablishedwithasensitivityof870U/L.Theaveragerecoveryratewas107.81%andtheaverageintraandintercoefficientofvaria

5、tion(CV)was6.7%and9.3%respectively.ThemethodwasappliedforrelativequantitativeanalysisofbenzylpenicilloylproteinfromGroupAStreptococcusPreparation.CONCLUSION:NinehybridomacellstrainsstablysecretingmAbagainstbenzylpenicillinwereobtained.ThedoubleantibodySandwi

6、chELISAforrelativequantitativeanalysisofbenzylpenicilloylproteinwasestablished.[Kcywords]bcnzylpcnicillin;bcnzylpcnicilloyl;mAb;doublcantibodySandwichELISA［摘耍］目的：制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法，对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。方法：将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，应用杂交

7、瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化，建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。结果：经细胞融合、筛选及克隆化，共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株，其中5株亲和力较高。建立/双抗体夹心ELISA相对定量检测方法，该方法灵敏度达到870U/L，平均冋收率为107.81%，批内变异系数平均为6.7%,批间变异系数平均为9.3%,可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。结论：成功地制备了抗青

8、霉素的mAb,并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。［关键词］青霉素；青霉噻唑基；单克隆抗体；双抗体夹心ELISA青霉素因其高效、低毒的特点在临床上被广泛应用，但其结构中的p内酰胺环很不稳定，在溶液状态尤其是碱性条件下易幵环与蛋白、多肽的氨基发生亲核反应生成稳定的青霉噻唑蛋白，形成临床主要的过敏原［1］。青霉素类抗生素的过敏反应发生率居各种药物之首［2］，青霉素不纯