融合蛋白CBD SPA“Z”基因的构建、表达与活性鉴定-论文.pdf

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1、第12卷第3期生物加工过程Vo1．12No．32014年5月ChineseJournalofBioprocessEngineeringMav2014doi：10．3969／j．issn．1672—3678．2014．03．010融合蛋白CBD—SPA“Z"基因的构建、表达与活性鉴定朱文杰，马军，张妍，金坚(1．江南大学药学院无锡214122；2．江南大学生物工程学院教育部2~-业生物技术重点实验室，无锡214122)摘要：针对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)层析柱的应用问题，将SPA的z结构域基因与纤维素结合结构域(CBD)重组，并在z

2、结构域c端引入1个半胱氨酸(Cys)，构建并表达出一种新型免疫亲和材料。利用基因工程技术将质粒pEZZ18中的z基因插入到含有CBD的质粒pET35b(+)质粒中，构建出原核表达载体pET35b(+)～Z—Cys，经IPTG诱导表达，获得CBD—ProteinZ融合表达蛋白。pET35b(+)～Z—Cys在E．coliBL21中正确表达，所表达的融合蛋白具有与哺乳动物IgG抗体结合的生物学活性和与纤维素结合的活性。结果证明CBD—ProteinZ蛋白具有z结构域与CBD结构域的活性，预计能在免疫亲和层析中用于IgG抗体的纯化。关键词：

3、纤维素结合结构域；免疫亲和层析；金黄色葡萄球菌蛋白A；z结构域：IgG纯化中图分类号：Q784文献标志码：A文章编号：1672—3678(2014)03—0052—06Construction，expression，andbiologicalassayoffusionproteinCBD-SPAZZHUWenjie，MAJun，ZHANGYah，JINJian(1．SchoolofPharmaceuticalScience，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China；2．KeyLaboratoryofInd

4、ustrialBiotechnologyoftheMinistryofEducation，SchoolofBiotechnology，JiangnanUniversity，Wuxi214122，China)Abstract：TosolvetheproblemsofstaphylococcalproteinA(SPA)application，recombiningthefusionproteinofcellulosebindingdomain(CBD)withZpeptideofSPA，introducingacysteineatthe

5、C—terminalofZpeptide，andconstructionandexpressionofimmuneaffinitymaterialwereinvestigated．ProkaryoticexpressionvectorpET35b(+)·Z—CyswasconstructedbyusingthegeneticengineeringtoclonetheZgeneofpEZZ18plasmidandinsertedintothepET35b(+)plasmidwithCBDgene，thusobtainingthefusi

6、onproteinCBD—proteinZbyIPTG．TheplasmidpET35b(+)一Z—CyswascorrectlyexpressedinE．coliBL21andthefusionproteinretainedthebio—functionaleffectsofZpeptideandCBD．CBDcouldbindtocelluloseandZpeptidebindtoimmunoglobulinG(IgG)ofmanymammalians，viaFcregionofIgG．Keywords：cellulosebind

7、ingdomain；immunoafinitychromatography；staphylococcalproteinA；Zpeptide；purificationofIgG各种微生物来源的纤维素酶普遍具有类似的结构，其中包括没有催化功能的纤维素结合结构域收稿日期：2013-05—07基金项目：国家大学生创新训练计划(201210295080)作者简介：朱文杰(1992一)，男，广东韶关人，学士，研究方向：生物制药工程；金坚(联系人)，教授，E-mail：Jinjian31@163．COB第3期朱文杰等：融合蛋白CBD—SPA“Z”基

8、因的构建、表达与活性鉴定53(cellulosebindingdomain，CBD)，其功能在与生物1材料与方法工程技术相关的研究中已经被广泛应用。金黄色葡萄球菌蛋白A(staphylococcalproteinA，SP