农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立-论文.pdf

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1、第53卷第12期湖北农业科学Vo1．53No．122014年6月HubeiAgriculturalSciencesJun．，2014农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立孙传波，郭嘉，袁英(吉林省农业科学院生物技术研究所，长春130033)摘要：以玉米(ZeamaysL．)HiII的幼胚为外植体，13一葡萄糖苷酸酶基因(G)为报告基因，通过农杆菌介导转化法对影响遗传转化体系的外植体大小、农杆茵浓度、热预处理温度、侵染时间、共培养及恢复培养时间、抗生素、筛选剂等因素进行优化，以建立农杆茵介导玉米幼胚遗传转化体系。结果表明，幼胚大小为1．0—1．5mm，农杆菌

2、茵液的DD60o为0．5，40热处理3min，侵染8rain，共培养3d和恢复培养4d，100m#L羧苄青霉素作为抑茵剂，双丙氨膦作为筛选剂时为最佳遗传转化条件。通过该优化体系已获得多种转基因玉米材料．表明该体系具有较高的可重复性和可靠性。关键词：农杆菌介导转化法；玉米(ZeamaysL．)；幼胚；遗传转化中图分类号：$513；Q789文献标识码：A文章编号：0439～8114(2014)12—2743—04EstablishingGeneticTransformationSystemofMaizeImmatureEmbryosMediatedbyAgr

3、obacteriumtumefaciensSUNChuan-bo，GUOJia，YUANYing(Agro-BiotechnologyResearchInstitute，JilinAcademyofAgricultureSciences，Changchun130033，China)Abstract：InordertoestablishgenetictransformationsystemofmaizeimmatureembryosmediatedbyAgrobacteriumtumefaciens，factorsincludingsizeofexplan

4、ts，concentrationofAgrobacteriumtumefaciens，temperatureofthermalpretreatment，infectiontime，cultivationandrecoverytime，antibiotics，screeningagentaffectinggenetictransformationsystemwereoptimizedusingimmatureembryosofHilIasexplantsandGUSasreportergene．Theresultsshowedthatthesizeofth

5、eembryoswas1．0to1．5mminlength．The0JD6。0ofAgrobacteriumwasadjustedto0．5be~reinoculation．Pretreatmentwas3minat40℃．Infectiontimewas8rain．Itwasco—cultivated3daysandrested4days．100m#LcarbenicillinwasusedtoeliminateAgrobacteriumandbialaphoswasusedasselectiveagent．Transgenicplantswereob

6、tainedbytheoptimizedsystem，whichwasahighlyandreliablesystem．Keywords：Agrobacteriumtumefaciens-mediatedmethod；maize(ZeamaysL．)；immatureembryos；genetictransformation玉米(ZeamaysL．)是重要的粮食作物和工业农杆菌介导转化法和基因枪转化法最为常用[3-5]，农原料作物之一，在国民经济生产中具有重要战略地杆菌介导转化法因具有外源基因整合位点稳定、转位。利用基因工程技术手段创制性状优异的转基因化

7、机理清楚、转基因后代拷贝数低、遗传稳定性好、玉米新种质具有重要的理论和现实意义．为玉米育实验操作方便、成本低等优点而更受青睐]。研究表种技术开辟了新途径。自1988年Rhodes等Eli首次明基因型和外植体是影响玉米遗传转化率的关键获得转基因玉米完整植株，1996年Ishida等[初步因素[．目前成功的基因型材料多为玉米A188和建立农杆菌遗传转化体系以来。玉米遗传转化研究HilI。而幼胚因再生能力明显高于其他部位而被广得到了迅速发展，目前已有多种转基因玉米商业化泛应用。建立稳定高效的遗传转化体系是研究转基生产。玉米遗传转化的方法主要有农杆菌介导转化因玉

8、米的关键，根据不同的转化方法和受体已建立法、基因枪转化法、合子转化法和花粉管通道