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1、麦类作物学报2007,27(2):188-192JournalofTriticeaeCrops农杆菌介导小麦成熟胚愈伤组织的遗传转化研究111,211陈立国,后猛,王玉海,崔发,王洪刚(1.山东农业大学农学院/国家小麦改良中心泰安分中心,山东泰安271018;2.峄城区农业局,山东峄城277300)摘要:为建立和优化小麦成熟胚愈伤组织遗传转化体系,以筛选出的适合小麦成熟胚组织培养再生的普通小麦山农2618为材料,采用农杆菌介导法对其成熟胚愈伤组织进行转化,对影响转化效率的因素如侵染菌液的浓度、侵染时间、超声波处理、真空处理等进行了研究。结果表明,这些因素对小麦成
2、熟胚遗传转化效率有很大影响。菌液侵染浓度OD600为0.8、侵染时间为60min时转化效率最高。在此基础上辅以超声波处理、真空处理可明显提高转化效率,最高转化率可达8.1%。对转化愈伤组织和转化植株分别进行GUS染色和PCR检测,结果表明外源基因已整合到小麦基因组中。关键词:小麦;农杆菌;成熟胚;愈伤组织;遗传转化中图分类号:S512.1;S336文献标识码:A文章编号:100921041(2007)0220188205GeneticTransformationthroughMatureSeed2derivedCallusofCommonWheatbyAgrob
3、acteriumTumefaciens111,211CHENLi2guo,KOUMeng,WANGYu2hai,CUIFa,WANGHong2gang(1.AgronomyCollege,ShandongAgriculturalUniversity/TaianSubcenterofNationalWheatImprovementCenter,Taian,Shandong271018,China;2.YichengBureauofAgriculture,Yicheng,Shandong277300,China)Abstract:Agrobacterium2medi
4、atedtransformationofcommonwheatthroughcallusinitiatedfromim2matureembryoshasprovedtobeaneffectiveway.But,obtainingalargenumberofimmatureembry2osoverashortperiodoftimeisalaboriouswork.Toovercomthislimitation,analternativewayofu2singcallusinitiatedfrommatureseedshastobeestablished.Alth
5、oughtherewasalsoaproblemoflowtransformationrate.InthisessaythecommonwheatSN2616wasused,theregenerationofwhichhasbeenestablishedbefore.Celldensity,inoculationtimeandtreatmentsofsonicationandvacuuminfiltrationonthetransformationefficicencybeenassayed.Agrobacterium2mediatedtransformatio
6、nassistedbyacombinationof7.5minsonicationwith7.5minvacuuminfiltrationresultedinthehigh2esttransformationfrequency.TheblueblotshadimprovedtheGUSexpressedinthecallusthroughhistochemicalGUSdetection.AndtheexistenceandintegrationofBG2geneintransgenicplantswereconfirmedbyPCR.Keywords:Whea
7、t;Agrobacterium;Matureembryos;Callus;Genetictransformation近十几年来,小麦遗传转化研究取得了长足抗除草剂基因bar导入小麦,首次获得了小麦转[1]进展。1991年,Vasil等利用基因枪法转化小基因植株。1993年,Vasil等又用基因枪法直接麦悬浮细胞获得了转化的愈伤组织,次年,利用同轰击幼胚,获得了可育转基因小麦株系,使转化效[2][3]样的方法转化长期培养的胚性愈伤组织,将编码率提高到了1%左右。1994年Becker等、[4]β2葡萄糖苷酸酶(β2glucuronidase)的gus基因和Nehr
8、a等分别利用基因枪法轰击
