大麦幼胚农杆菌介导

《大麦幼胚农杆菌介导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、1基金项目：甘肃省农牧厅生物技术专项“啤酒大麦籽粒蛋白质表达的遗传调控及种质创新”（GNSW-2006-05）作者简介：李静雯(1979-)，女，硕士，助理研究员，从事基因工程在作物育种中的应用研究。E-mail：lj-lg614@!63.com;Tel：13519311435（请勿公开）*通讯作者：张正英，副研究员，从事农业生物技术研究。通讯地址：兰州市安宁区农科院新村1号。E-mail：kegc8@sina.com根癌农杆菌介导的大麦幼胚遗传转化影响因素研究李静雯，张正英*(甘肃省农业科学院生物技术研究所，甘肃兰州73

2、0070)摘要：为建立和优化根癌农杆菌介导的大麦遗传转化体系，以大麦幼胚为转化受体，研究了根癌农杆菌介导法转化大麦的主要影响因素。结果表明，以gus基因瞬时表达率、抗性愈伤组织诱导率为转化指标，筛选出了对大麦幼胚感染力比较强的农杆菌菌株EHA105，以及高敏感受体基因型甘啤4号和秀81-47等。实验结果还表明，预培养1d的大麦幼胚具有较高的瞬时表达率（91%），是较好的转化受体。菌液侵染浓度OD600=0.5，侵染时间为30min时转化效率最高。在此基础上，侵染后幼胚与农杆菌采用液体共培养方式可明显提高转化效率，gus基因

3、瞬时表达率最高可达90%。在优化条件下，转化约30d后抗选择剂潮霉素的愈伤组织占受体组织总数的34.2%。关键词：大麦；幼胚；根癌农杆菌；遗传转化FactorInfluencingTransformationofBarley(HordeumvulgateL.)ImmatureEmbryosMediatedbyAgrobacteriumtumefaciensLiJing-wen,Zhangzheng-ying*(BiotechnologyResearchInstitute,GansuAcademyofAgricultural

4、Sciences,Gansu,Lanzhou,730070)Abstract:ToestablishandoptimizebarleytransformationsystembyAgrobacterium-mediated,immatureembryoswereusedastargetmaterials.ImportantfactorsthatinfluenceAgrobacterium-mediatedtransformationofbarleywereinvestigated.Theresultsshowedthat,

5、usingtransientGUSexpression,thefrequencyofresistantcalliasacriteria,OnehighlyinfectiousAgrobacteriumtumefaciensstrainstobarleyandsomehighlysensitivebarleyacceptorswereob-tained.Thebarleyimmatureembryoswerepre-culturedfor1day,andusingtheCelldensityofOD600=0.5and30m

6、inutestoinoculateimmatureembryos,whichwasoptimalconditionsforAgrobacterium-mediatedtransformationofbarleyimmatureembryos.Undertheseoptimalconditions,hygromycinresistantcalliwas34.2%ofoftotalexplantsinfectedafterabout30days.Keywords:Barley;Immatureembryo;Aarobacter

7、iumtumefaciens;Genetictransformation禾谷类作物的遗传转化现已广泛用于改良作物品质，也是功能基因组学研究的有力手段[1]11。大麦作为世界上第四大粮食作物在全球100多个国家广泛种植。除了其自身的重要研究价值，大麦（二倍体）也可作为研究其他遗传背景更为复杂的六倍体禾谷类作物（如小麦）的模式作物。因此建立一个高效的大麦遗传转化体系是很有必要的。大麦的遗传转化始于20世纪90年代。1994年Wan等利用基因枪介导法获得了世界上第一例可育大麦转基因植株[2]。1997年Tingay等首次采用农杆

8、菌介导法将外源基因导入大麦幼胚并成功获得了大麦转基因植株[3]。此后基于改进大麦遗传转化体系的大量研究逐步开展[4-5]。虽然以小孢子或子房做为基因转化受体的大麦转基因蔚然兴起[6-7]，但是获得较高的遗传转化效率，幼胚仍然是首选的转化受体[8]。与基因枪介导法相比，农杆菌介导法具有操作简单、成本低、转