蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立-论文.pdf

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1、第36卷第2期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．22014年2月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineFeb．2014doi：10．3969d．issn．1008-0589．2014．02．01蓝舌病病毒反向遗传操作系统的建立杨涛，徐青元，孙恩成，冯瑜菲，李俊平，孙亮，孙晶，吴东来(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部兽医公共卫生重点开放实验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为建立蓝舌病病毒(BTV)的反向遗传操作系统，本研究构建了分别表达血清1型BTvSZ97／1

2、株vP1、VP3、VP4、VP6、vP7、NS1和NS2蛋白的7个真核表达质粒，同时又构建了舍有SZ97／1株BTv的全部10个基因节段的T7聚合酶体外转录重组质粒。并利用T7RNA聚合酶对酶切线性化的10个体外转录质粒进行体外转录，制备BTV全部10个基因的体外转录RNA。将已构建的7个真核表达质粒和体外转录获得的RNA产物依次共转染BHK．21细胞，拯救出含有分子标记的BTV。本研究首次在我国建立了BTV的反向遗传操作系统，为我国深入开展该病毒致病机理、传播机制、基因组功能的研究以及新型疫苗的研发奠定了基础。关键词：蓝舌病；蓝舌病病毒；反向遗

3、传学中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)02．0085．05EstablishmentofareversegeneticssystemforbluetonguevirusYANGTao，XUQing—yuan，SUNEn—cheng，FENGYu—fei，LIJun—ping，SUNLiang，SUNJing，WUDong-lai(StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，VeterinaryPubicHealthLaboratoryofMinistryof

4、AgriculturalHarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Toestablishareversegeneticssystemofbluetonguevirus(BTV)，sevenadditionaleukaryoticexpressionrecombinantplasmidsweregeneratedwhichexpressedsevenproteins(VP1，VP3，VP4，VP

5、6，VP7，NS1，andNS2)ofserotype1BTVstrainSZ97／1．respectively．andtenT7／'nvitrotranscriptionrecombinantplasmidsforBTVtranscriptswereconstructedfora1l10segmentsoftheSZ97／1virusgenome．respectively．BTVtranscriptswereproducedfromthelinearizedT7transcriptionrecombinantplasmidsusingT7RNA

6、polymerase抽vitrotranscriptionKit．Inaddition．theBTVwithgeneticmarkerofAftIIrestrictionenzymesiteintroducedinsegment10wasrescuedf．romBHK一21cells．whichwerefirstCO—transfectedwiththesesevenadditionaleukaryoticexpressionrecombinantplasmids，andfollowedbysecondtransfecfionwithacompl

7、etesetofthetenT7transcriptsofBTVat18hourspostinitialtransfection．Inthepresentstudy．areversegeneticssystemofBTVwasdevelopedwhichwasthefirsttobereportedtheestablishmentofreversegeneticssystemforBTVinChina．Thistechniqueplatformwouldnotonlyfacilitatefurtherinvestigationsofthepath

8、ogenesis，mechanismoftransmission，andgenomeproteinfunctionofBTV，butal