蓝舌病病毒感染诱导细胞自噬的作用和机制.pdf

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4、论文编号:中国农业科学院学位论文蓝舌病病毒感染诱导细胞自噬的作用和机制TheEffectandMechanismofCellularAutophagyInductionduringBluetongueVirusInfection博士研究生：吕爽指导教师：吴东来研究员申请学位类别：农学博士专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物及其分子生物学培养单位：哈尔滨兽医研究所中国农业科学院研究生院2016年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDiss

5、ertationTheEffectandMechanismofCellularAutophagyInductionduringBluetongueVirusInfectionMs.Candidate：LvShuangAdvisor：Prof.WuDong-laiMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty：VeterinaryMicrobiologyandMolecularBiologyMay2016摘要蓝舌病(Bluetongue，BT)是由蓝舌病病毒(

6、Bluetonguevirus，BTV)引起的一种重要虫媒传染病，可引起反刍动物特别是绵羊较高的发病率和致死率，对畜牧业的发展和畜产品的经济贸易造成潜在的巨大威胁。BTV属于呼肠孤病毒科环状病毒属，是一种复杂的双链分节段RNA病毒，拥有双层衣壳，无囊膜。作为环状病毒属的一个典型代表，BTV在分子结构、生化特征、流行病学和诊断方法等分子生物学领域已取得了重大进展，然而，BTV感染与宿主细胞应答之间的相互作用并没有得到充分的关注，因此从宿主的角度去探索BTV的致病机制显得尤为重要。病毒作为一种专性细胞

7、内寄生物，其在感染过程中必定会与宿主的胞内应答发生相互作用。细胞自噬(Autophagy)作为一种保守的胞内适应性应答，在维持细胞稳态，促进新陈代谢方面起着举足轻重的作用。它可将细胞内的衰老细胞器、外源微生物等成分包裹在一个称为自噬体的双层膜结构中，运送至溶酶体进行降解回收。自噬是对抗病原体的天然防御机制，但最近越来越多的证据表明许多病毒已进化出多种策略抵抗、逃逸、甚至利用细胞自噬促进自身增殖，如流感病毒、丙型肝炎病毒、登革热病毒、轮状病毒等。对于BTV而言，其复制感染与细胞自噬之间的相互作用及其

8、启动机制便是本研究中要探索的问题。首先，采用三种经典方法对BTV1感染BSR细胞后是否诱导自噬进行了检测，包括透射电镜观察自噬体的形成、激光共聚焦检测荧光聚点的变化以及Westernblot分析LC3的转化。结果表明，与阴性对照相比，BTV1感染后诱导BSR细胞产生了自噬体样的双层膜结构，GFP-LC3荧光聚点显著累积，而且LC3发生了明显的类别转化。此外，在BTV的自然宿主靶细胞-原代羊舌上皮细胞上进行了分析，得到了类似的结果。由此证实BTV1感染可以诱导细胞自噬的发生。其次，进