细叶远志皂苷调节细胞自噬抗Aβ诱导细胞损伤的作用及机制

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________细叶远志皂苷调节细胞自噬抗Aβ诱导细胞损伤的作用及机制姓名：李巧学号：2111540069院系：药学院学位类型：学术学位专业：微生物与生化药学研究方向：新药筛选与机制研究导师：杨红教授论文提交日期：2018年5月22日论文答辩日期：2018年5月16日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文TheProtectiveEffectsofTenuifolinonAβ-inducedCellInjuryThr

2、oughRegulateAutophagyandPotentialRelatedMechanismCandidate：QiaoLiStudentID：2111540069Affiliation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：MicrobialandBiochemicalPharmacySupervisor：Prof.HongYangDayofDefence：May2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceutica

3、lUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文细叶远志皂苷调节细胞自噬抗Aβ诱导的细胞损伤的作用及机制摘要细叶远志皂苷(Tenuifolin,Ten)是从远志中提取的主要活性成分。中药远志(Polygalatenuifolia)具有安神益智的功能，传统上常用于提高记忆力和治疗痴呆症。有研究表明，远志具有减少Aβ异常沉积，抑制Tau蛋白磷酸化，调节胆碱酯酶系统功能，减少炎性介质的产生，抑制谷氨酸过度释放引起的神经毒性，抗氧化和抑制细胞凋亡等作用，从而发挥抗AD及神经保护作用。但Ten发挥抗AD活性的

4、具体作用和分子机制还有待进一步阐明，尤其是Ten对Aβ产生及Aβ毒性作用的影响和分子机制。本论文研究了Ten通过调控细胞自噬在抗Aβ诱导的SH-SY5Y细胞损伤中的作用，探讨了Ten调控自噬信号通路的分子机制，为细叶远志皂苷应用于AD治疗提供新的靶点和科学依据。具体内容如下：1、Ten调节细胞自噬对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞形态和活力的研究：MTT法检测细胞活力，结果显示，50μMTen可以改善SH-SY5Y细胞中20μMAβ25-35诱导的细胞形态和提高Aβ25-35诱导的细胞活力，而自噬抑制剂3-MA能拮抗Ten的保护作用。结果表明Ten通过激活自噬改善了Aβ25-35

5、诱导的细胞形态损伤和细胞活力下降。2、Ten调节细胞自噬对Aβ诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激的研究：DCFH-DA荧光探针测定ROS水平，硫代巴比妥酸(TBA)测定MDA水平，WST-8法测定SOD活性，NADPH法测定GSH-Px活性，紫外线吸收法测定CAT活性，结果显示，Ten能够降低Aβ25-35诱导ROS和MDA浓度，并提高SOD、GSH-Px及CAT的活性，而加入自噬抑制剂3-MA会拮抗Ten的抗氧化作用。结果表明，Ten通过激活自噬减轻Aβ25-35诱导产生的氧化应激损伤，提高了细胞抗氧化能力。I广东药科大学硕士研究生学位论文3、Ten调节细胞自噬对Aβ诱导的S

6、H-SY5Y细胞炎症反应的研究：RT-PCR检测IL-1β、IL-6和TNF-ɑmRNA的表达水平变化，结果显示，Ten能降低Aβ25-35诱导的IL-1β、IL-6和TNF-ɑmRNA的表达水平，而加入3-MA会拮抗Ten的抗炎作用。结果表明，Ten通过激活自噬显著减轻SH-SY5Y细胞中Aβ25-35诱导的炎症损伤。4、Ten调节细胞自噬对SH-SY5Y细胞中Aβ产生的研究：RT-PCR检测APP和BACE1mRNA的表达水平变化，Elisa检测BACE1、Aβ1-40和Aβ1-42水平，结果显示，Ten能显著降低SH-SY5Y细胞中Aβ25-35诱导的BACE1mRNA

7、的表达水平和BACE1、Aβ1-40和Aβ1-42的浓度，而Ten和Aβ25-35对APPmRNA的表达水平无显著影响，加入3-MA会拮抗Ten减少Aβ产生的作用。结果表明，Ten通过激活自噬抑制SH-SY5Y细胞中BACE1的活性，从而减少Aβ产生。5、Ten对Aβ诱导细胞自噬的分子机制研究：RT-PCR和western检测Beclin-1、LC3、mTOR、AMPK和ULK1mRNA及蛋白水平变化，结果显示，Aβ25-35能增加SH-SY5Y细胞中Beclin-1、LC3mRNA和Beclin-1蛋