鉴别猪伪狂犬病病毒强毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、华北农学报·2014，29(2)：94—97鉴别猪伪狂犬病病毒强毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立顾阳，高晓云，程琨2，潘鑫龙，崔保安，陈红英(1．河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002；2．河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002)摘要：根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、g日基因序列，设计合成了2对特异性引物，分别建立g和g日基因的单项PCR扩增方法。通过对PCR扩增条件的优化，建立了鉴别PRV强毒和疫苗毒的双重PCR检测方法，即利用一次PCR反应，从强毒株基因组中可同时扩增出2

2、条大小分别为429bp(gE基因)、355bp(gH基因)的特异性片段，从弱毒株DNA中仅扩增出1条大小为355bp的片段，而猪圆环病毒2型和猪细小病毒DNA扩增结果均为阴性。敏感性试验表明，所建立的双重PCR检测方法最低有效检测量为1×10TCID／0．1mL。该方法适合对PRV强毒和疫苗毒的快速鉴别诊断。关键词：伪狂犬病毒；双重PCR；检测；强毒株；疫苗株中图分类号：$828文献标识码：A文章编号：1000—7091(2014)02一O094—04DevelopmentofDuplexPCR

3、MethodfortheDiferentiationofVirulentandVaccineStraiUSofPseudorabiesVirusGUYang，GAOXiao—yun，CHENGKun。，PANXin．1ong，CUIBao．an，CHENHong—ying(1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China；2．CollegeofLifeSc

4、ience，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)Abstract：BasedonthegEandgHgenesofpseudorabiesvirus(PRV)，twopairsofspecialprimerswerede—signed，respectively，singlePCRassaysforgEandgHgeneswereestablished．Undertheoptimizedamplificationconditions，

5、theduplexPCRmethodwasestablishedtodifferentiatevirulentandvaccinestrainsofpseudorabiesvi—rus．InaduplexPCRassay，twofragmentsof429bpforgEgeneand355bpforgHgeneweresimultaneouslyam—plifiedfrompseudorabiesvirusvirulentstrainsDNA，onlya355bpfragmentforgHgen

6、ewasamplifiedfrompseud-orabiesvirusvaccinestrainsDNA，whereasnoPCRproductswereamplifiedfromporcinecireovirustype2andpor-cineparvovirus．ThenthedetectionlimitofduplexPCRwasestimatedtobe1×10TCID5o／0．1mL．Thismethodissuitablefordifferentiationofwild-typeps

7、eudorabiesvirusandvaccinestrainsinclinicalspecimen．Keywords：Pseudorabiesvirus；DuplexPCR；Detection；Virulentstrains；Vaccinestrains伪狂犬病(Pseudorabies，PR)是由伪狂犬病病毒对养猪业造成了重大的经济损失。(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的多种家畜(猪、牛、对于PR的防制主要依靠自然弱毒疫苗及基因羊等)和野生动物以发热、奇痒(猪除外)及神经系

8、工程缺失疫苗的广泛应用，可使猪免于发病，但不能统症状和脑脊髓炎为主要特征的一种重要传染阻止野毒的潜伏感染。此外，常规的血清学检测方病l_lJ。猪是该病毒重要的贮存宿主和传染源。自法无法区分疫苗免疫猪和野毒感染猪J。目前，从2012年下半年以来，我国PR发病率明显上升，PRV的检测方法主要有病毒分离鉴定、ELISA血清收稿日期：2013—10—09基金项目：河南省重大科技项目(111100110300)作者简介：顾阳(1991一)，女，河南淅川人，在读硕士，主要从事分子免疫学和分子病毒学研究。通讯