猪伪狂犬病病毒双重pcr鉴别方法的建立

《猪伪狂犬病病毒双重pcr鉴别方法的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、130广东农业科学2015年第17期猪伪狂犬病病毒双重PCR鉴别方法的建立李 艳，李 段，向 蓉，刘燕玲，蒋智勇，张乐宜，蔡汝健，李春玲（广东省农科院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/广东省兽医公共卫生公共实验室，广东广州510640）摘 要：根据GenBank已发表的猪伪狂犬病毒（PRV）的gB、gE基因序列，分别设计了2对特异性引物，建立了一种鉴别诊断猪伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒的双重PCR检测方法。应用该方法可从野毒基因组中扩增出与预期大小相符的2条特异性条带，分别为122bp（gE）和246bp（

2、gB）；从疫苗株基因组中仅扩增出1条特异性条带，为246bp（gB）。结果显示，该方法灵敏度高、特异性强，适用于PRV的临床诊断和流行病学调查。关键词：伪狂犬病病毒；双重PCR；鉴定中图分类号：S828文献标识码：A文章编号：1004-874X（2015）17-0130-04EstablishmentofduplexPCRassayforidentificationofpseudorabiesvirusLIYan，LIDuan，XIANGRong，LIUYan-ling，JIANGZhi-yong，ZHANGLe-yi

3、，CAIRu-jian，LIChun-ling（InstituteofAnimalHealth，GuangdongAcademyofAgriculturalSciences/GuangdongOpenLaboratoryofVeterinaryPublicHealth/GuangdongLaboratoryforAnimalDiseases，Guangzhou510640，China）Abstract：BasedonthegBandgEgenesofpseudorabiesvirus（PRV），twopairsofsp

4、ecialprimersweredesigned，duplexPCRfordistinguishingthewildstrainandvaccinestrainofPRVwasestablished.BythisduplexPCRassay，twospecificfragmentsof122bp（gE）and246bp（gB）weresimultaneouslyamplifiedfromfieldisolateDNA，onlya246bp（gB）fragmentwasamplifiedfromvaccinestrain

5、DNA.Theresultsindicatedthatthemethodwasspecific，sensitive，andcouldbeusedforrapiddiagnosisandepidemiologicalinvestigationofPRVinfection.Keywords：pseudorabiesvirus；duplexPCR；identification［4-5］猪伪狂犬病（pseudorabies，PR）是猪伪狂犬母猪繁殖障碍。该病毒除感染猪外，还可感染［2，6］病毒（pseudorabiesviru

6、s，PRV）侵染多种家畜和其他动物，如羊、牛、狗、鼠等。20世纪70年野生动物引起的急性传染病，被世界动物卫生组织代以来，我国广泛使用PRVgE基因缺失疫苗进行（WorldOrganizationforAnimalHealth，OIE）列为PR防控，但疫苗无法清除猪体内已感染的野毒，［1］法定报告疾病。该病以发热、奇痒（猪除外）及造成野毒长期在机体内潜伏、复制并不断向外排［2-3］神经系统症状和脑脊髓炎为主要特征。PRV可毒，因此无法真正消除该病。2011年下半年以来，引起仔猪神经症状甚至死亡、严重的呼吸道疾病及我国多

7、个使用gE基因缺失弱毒疫苗免疫的规模化［7］猪场出现了PRV野毒感染，对养猪业造成了严收稿日期：2015-05-12重经济损失。因此，迫切需要建立可准确区分PRV基金项目：广东省科技厅农业攻关项目（2012A020野毒和疫苗毒的简单、敏感和特异的检测方法。200014，2013B020202002）；广东省现代农业产业技术体gB基因是PRV所有糖蛋白中最保守的基因，系建设专项（粤农［2009］380号）；广东省农业科学院也是病毒复制不可缺少的基因，该基因可用于区分院长基金（201313）；粤北生猪生产及疫病防控协同创新

8、［8］PRV和其他病毒。而gE基因是PRV的主要毒发展中心项目力基因之一，目前世界各国广泛使用的PRV基因作者简介：李艳（1980–），女，博士，助理研究员，缺失疫苗多为gE基因缺失苗，gE基因可用于区分E-mail：cyhlly@126.com［9］通讯作者：李春玲（1965-），女，博士，研究员，PR野毒和疫苗毒。鉴于此，本研