多重PCR快速诊断猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型与猪细小病毒方法的建立-论文.pdf

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1、福建农林大学学报(自然科学版)第43卷第1期JournalofFujianA~culmmandForestryUniversity(NaturalScienceEdition)2014年1月多重PCR快速诊断猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型与猪细小病毒方法的建立谢燕婷’，郑敏，石磊。，王隆柏，张志刚’(1．厦门银祥集团有限公司肉食品安全生产技术国家重点实验室，福建厦门361100；2．福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福建福州350013；3．华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640)摘要：利用PrimerPremier5．0及DNAstar软件对猪伪狂犬病毒gB基因、猪

2、圆环病毒2型ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的保守区进行引物设计，选出扩增序列为猪伪狂犬病毒(373bp)、猪圆环病毒2型(430bp)和猪细小病毒(495bp)的3对引物．敏感性和特异性试验结果表明，mPcR对3种病毒的核酸检测限量从猪伪狂犬病毒至猪细小病毒分别为1．62×l0～、1．47×10和1．28×10～tag，对灭菌双蒸水、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒eDNA和猪瘟病毒eDNA的mPCR扩增结果均为阴性．mPCR可作为临床上猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染和猪细小病毒病的病原学快速诊断方法．关键词：多重PCR方法；猪伪狂犬病病毒；猪圆环病毒2型；猪细小病毒中圈分类

3、号：s855．3文献标识码：A文章编号：1671-5470(2014)01-0060-05EstablishmentofmultiplexPCRforrapiddetectionofporcinepseudorabiesvirus．porcinecircovirustypeⅡandporcineparvovirusXIEYah—ting，ZHENGMin2SH[Lei’，WANGLong—bai2ZHANGZhi-gang，，(1．StateKeyLaboratoryofFoodSafetyTechnologyforMeatProducts，XiameuYinxiangGr

4、oupCO，Lid，Xiameu，Fui361100，China；2．InstituteofAnimalHusbandryandVe~finaryMedicine，FujianAcademyofA~culturalSciences，Fuzhou。Fuiian350013，China；3．CoHegeofLightIndustryandFoodSciences，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou，Guangdong510640，China)Abstract：AccordingtothegenesequencesinGenBan

5、kofPRV，PCV2ORF2，PPVVP2，specificprimersforeachofthreecommonDNAvirusesweredesignedbyPrimerPremier5．0andDNAst~software，andthreespecifcbands，res1ely，PRV(373bp)，PCV2(430Sp)，PPV(495bp)wereamplified．ItWaSshownthatmPCRwasabletodetecta8l讯lea81．62×10一，1．47×10and1．28×10ngofeachviraltargetthm1lgIItheh

6、ighlysensitiveandspecifcityassay．AnddeteetiousofddH20，PRRSV，SVwerenegativeatthe8allletime．Inconclusion，mPCRwouldbeUs~ulinroutinemoleculardiagnosisandepidemiologyofPRV，PCV2andPPV．Keywords：n1PCR；PRV；PCV2；PPV从病料中分离出的具致病作用的病毒称为猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2，PC~2)，而从传代细胞系PK-l5中分离到的圆环病毒称为猪圆环病毒毒1

7、型(porcinecircovirustype1，PCVI)¨．PCV2感染后会出现断奶仔猪多系统消耗综合征(postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)、猪皮炎肾病综合征、猪呼吸系统混合疾病、繁殖障碍症．现“猪圆环病毒病”(porcineeircovirusdiseases，PCVD)的含义是指群体病或是与PCV2相关的疾病】．PCV2是引起PMWS发生的主要原因，但其他病原如PPV等的混合感染也具有重要的协同致病性J．伪狂犬病病毒(pseudorabiesvires