应用PCR检测猪伪狂犬病毒野毒的研究.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiAgn．Sci．2014，42(9)：2548—2549，2553责任编辑石金友责任校对李岩应用PCR检测猪伪狂犬病毒野毒的研究5长婕，李增奎(1．青海省大通县东峡镇畜牧兽医站，青海大通81o1o4；2．青海省畜牧兽医科学院，青海西宁81ooo3)摘要[目的]对猪伪狂犬病毒野毒进行检测。[方法]根据已发表的猪伪狂犬痛病毒gE基因核苷酸序列，设计合成1对引物，扩增片段长度为276bp，优化PCR反应条件，建立检测PRV野毒的PCR方法。[结果]利用建立的PCR方法检测疑似PRV野毒感染的临床送检组织病料34份，阳性样品18份，阳性

2、率达52．94％(18／34)，选取6份阳性病料PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司进行序列鉴定，测序结果表明均为PR~gE基因特异性序列。[结论]该方法敏感、特异、可靠，可用于PRV野毒感染的快速诊断和流行病学调查。关键词猪伪狂犬病毒；gE基因；PCR；检测中图分类号S852．651文献标识码A文章编号0517—6611(2014)09—02548—02ApplicationofPCRforDetectionofPorcinePseudorabieswildStrainVirusZHANGJieetal(DongxiaTownAnimalHusbandryan

3、dVeterinaryStationofDatongCounty，QinghaiProvince，Datong，Qinghai810199)Abstract[Objective]Todetectporcinepseudorabiesvirus．[Method]BasedonpublishedpseudorabiesvirusgEgenesequence，designedandsynthesizedonepairsofprimers，amplifiedfragmentlengthwas276bp，afteroptimizationofPCRreactionconditio

4、ns，establishedaPCRmethodfordetectionofPRVwildstrainvirus．『ResultlBvusingPCRmethod，34suspectedPRVwildstrainvirusweredetected，positivesamples18，pos—itiverateupto52．94％(18／34)，6positivesamplesofPCRproductswereidentifiedbyShenggongBiologyEngineering(Shanghai)Co．Ltd．，thesequencingresultsindic

5、atedtheyareallPRVgEgenespecificitysequence．[Conclusion]Themethodissensitive，specificandreliable，whichcanbeusedforrapiddiagnosisandepidemiologiealinvestigationofPRVwildvirusinfection．KeywordsPorcinepseudorabiesvirus：gene：PCR；Detection猪伪狂犬病(pseudorabies，PR)是由猪伪狂犬病毒(pseu—和猪传染性胃肠炎病毒(PEDV)一猪流

6、行性腹泻病毒(TGEV)dorabiesvirus，PRV)引起的猪的一种急性、热性、败血性传染二联活疫苗，均购自哈尔滨维科生物技术开发公司；猪繁殖病-2]。PRV属疱疹病毒科(Herpesvifidao)a一疱疹病毒亚科与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒疫苗(CH一1R株)和猪瘟(Alpha—herpesvirinae)，具有疱疹病毒的典型特征，可引起猪病毒(CSFV)活疫苗(细胞源)，均购自普莱柯生物工程股份的潜伏感染。PRV的潜伏感染并不使感染猪表现临床有限公司产品；疑似PRV野毒感染猪组织病料，由青海省畜症状，但可使感染猪终身带毒并排毒，增加了PR预防控制的牧兽

7、医科学院第一实验室收集并保存。难度，故对PRV潜伏感染猪的筛查至关重要。目前，世界1．1．3主要试剂。蛋白酶K、Taq酶和dNTP，均购自TaKa—各国广泛应用PRVgE基因缺失疫苗进行PR的防控，且欧Ra公司；SDS、苯酚、氯仿和无水乙醇，均为国产分析纯，美等发达国家应用PRVgE基因缺失弱毒疫苗与其配套的鉴市售。别诊断方法已经实现了PRV的净化j。我国自20世纪701．2方法年代中期以来，广泛使用基因缺失弱毒疫苗，其对PR的1．2．1引物设计与合成。参照GenBank上的PRVgE基因防控起到了重要的作用，但同时也给PRV野毒感染和疫