基于绿色荧光标记的甘草遗传转化体系的建立-论文.pdf

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1、2014．4作物杂志Crops基于绿色荧光标记的甘草遗传转化体系的建立李兴欣孟义江罗婉娇李会葛淑俊(河北农业大学／华北作物种质资源教育部重点实验室，071001，河北保定)摘要用根癌农杆菌EHA105菌株介导查尔200mg／L。该体系通过检测再生苗根部GFP荧光筛酮异构酶基因(cm)转化甘草，建立基于绿色荧光选转化植株，简化了阳性苗的鉴定过程，阳性苗比率标记的高效遗传转化体系。通过比较子叶、子叶节、可达10％。该体系为研究甘草药用成分代谢途径去子叶胚3种外植体的再生能力，确定不定芽分化中相关基因的功能和作用机制

2、奠定了基础。率高达73％的去子叶胚为适宜转化的受体。高效关键词乌拉尔甘草；根癌农杆菌；遗传转化；遗传转化体系为：分化和生根培养基中草铵膦除草GFP检测剂(PPrF)筛选压力分别为2．0和1．Omg／L；工程菌浓度0D=0．5；侵染时间30min；共培养基中乙酰甘草(GlycyrrhizauralensisFisch．)是豆科甘草丁香酮(AS)浓度为50mg／L；共培养时间为4d；分化属灌木状草本植物，根和根茎中有丰富的甘草酸、甘和生根培养基中噻孢霉素(Cef)浓度分别为300和草次酸和黄酮类化合物等，是我国主要

3、大宗常用药作者简介：李兴欣，在读硕士，研究方向为药用植物遗传育种，盂义江物之一，其中，甘草苷被中华人民共和国药典规定为为并列第一作者评价甘草品质的重要指标之一。建立高效遗传转化葛淑俊为通信作者，博士，研究方向为药用植物遗传育种体系是明确甘草苷合成关键基因作用机制和进行甘基金项目：河北省科技支撑计划(09276424D)收稿日期：2014一叭一15；修回日期：2014-03—27草品质改良的基础。已有研究主要是基于发根农杆SolubleSugarContentandMolecularMarkerDetecting

4、ofSweet．RelatedAllelesinSweetCornInbredLinesQuPengyan，LiYaohua，GaoJio，DingXiaoyu，TuJialu，WangGuoqiang，LiuChaoxian，WangJiuguang，LiuZhizhai(CollegeofAgronomyandBiotechnology，SouthwestUniversity，Chongqing400715，China)AbstractMolecularmarkercanbeusedasaneffectiv

5、eassistantinmaizebreeding，especiallyinsweetcornbreedingthatfullyfocusedontherecessivehomozygoussweet—relatedgenes．22sweetcorninbredlinesweregenotypedwith12molecularmarkersdevelopedvia7sweet—relatedgenes，i．e．shrunken2(sh2)，brittleendosperm2(bt2)，amyloseextend

6、erj(aeJ)，sugary2(su2)，shrunkenJ(shJ)，miniatureseedJ(mnJ)，anddullendospermJ(duJ)．Inaddition，thesolublesugarcontentoftheselineswasalsodeterminedat20daysafterpollination(DAP)．Resultsshowedthatthesolublesugarcontentofthese22sweetcorninbredlinesat20DAPrangedfrom1

7、8．83％to25．58％，suggestedthatthesematerialswereallsupersweetinbreds．Resultsfromthegenotypingindicatedthattheselinespossesseddominanthomozygousallelesat7lociofCL1742(ae)，CL1800(duJ)，CL1139(mn)，CL1470(sh2)，SOG1205(bt2)，SOG0157(shJ)，andphiO44(sh)．Genotypedwith4lo

8、ciofIDP202(su2)，IDP584(su2)，Bt2—353(bt2)，andphi028(shi1)，16—20sweetlinesalsoexhibiteddominanthomozygousalleles，whilenoproductsweredetectedwithintherestlines．Fingerprintedwiththelocusofphi033(sh)