柠檬遗传转化体系的建立及优化.pdf

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1、第53卷第9期湖北农业科学Vo1．53No．92014年5月HubeiAgriculturalSciencesMay．，2014柠檬遗传转化体系的建立及优化仝铸，何利刚，吴黎明，王志静，蒋迎春，孙中海(湖北省农业科学院果树茶叶研究所，武汉430064)摘要：以pCAMBIA1391Z为载体，对农杆菌EHA105介导的柠檬[C／truslimon(L．)Burm．￡]遗传转化体系进行了优化。结果表明．培养基中植物激素的浓度、农杆菌浸染浓度以及浸染后共培养的时间对柠檬的再生和遗传转化效率均有明显影响1．0mg／L6一BA和0．1mg／L的NAA有利于柠檬上胚轴不定芽的再生，

2、并且再生芽的质量最佳。农杆茵的浸染浓度以OD~-O．6为最佳，浸染后共培养2d，在合5．0mg／L潮霉素的筛选培养基上筛选．有利于柠檬不定芽再生率的提高。关键词：柠檬[C~rusfimon(L．)Burm工]；上胚轴；再生；遗传转化体系；优化中图分类号：$666．5；Q813．1文献标识码：A文章编号：0439—8114(2o14)09—2100—03EstablishmentandOptimizationofGeneticTransformationSystemofLemon[C／truslimon(L．)Burm．f．]TONGZhu，HELi-gang，W

3、ULi

4、-ming，WANGzm-jing，JINGYing-chun，SUNZhong-hai(InstituteofFruitandTea，HubeiAcademyofAgriculturalSciences，Wuhan430064，China)Abstract：UsingpCAMBIA1391Zasvector，thegenetictransformationsystemoflemon[Citruslimon(L．)Burm工]withA-grobacterium-mediatedbyEHA105wasoptimized．Theresultsshowedthatconce

5、ntrationofplanthormones，inoculumdensityandco—cultivationtimehadsignificanteffectsonlemonregenerationandtransformation．Itwasmostconducivetotheregener-ationofadventitiousbudslemonepicotylbyadding1．0mg／L6-BAand0．1mg／LNAAinMTmedium．Thebestinoculumdensityandco-cultivationtimewere0．6(DD600)and

6、twodays．Fortheadventitiousbudregenerationoflemon，themostbenificalscreeningconcentrationofhygromycinwas5．0mg／L．Keywords：lemon[Citruslimon(L．)Buro．￡]；epicotyl；regeneration；genetictransformationsystem；optimization柑橘类水果是世界第一大水果．也是湖北省第尤力克柠檬的不定芽的发生因素进行了初步研究一大水果包括柠檬在内的柑橘类多年生果树由于因此．在进行基因功能验证前．有必

7、要对其目标植多胚性等特点．很难通过传统的育种途径培育含有物的再生和遗传转化体系进行相应的优化柠檬是目标性状且品质优良的后代⋯生物技术特别是基柑橘类植物中最不抗寒的品种，本研究以pCAMBI．因工程的发展为柑橘类水果遗传改良开辟了一条A1391Z为载体．对农杆菌EHA105介导的柠檬遗传新途径[柑橘转基因研究已开展近20年．尽管在转化体系进行了优化，建立其高效遗传转化体系，大多数柑橘类植物中如甜橙、金柑、枳、葡萄柚已获以期为抗寒基因在柑橘类植物中的功能验证和分得成功[3-5]．但是柑橘类水果的不同属间遗传特性差析提供一个良好的试验平台异较大．即使是同属的不同类型之间．其再

8、生的难1材料与方法易和对农杆菌的反应也不尽相同[。提高柑橘类转化效率的研究主要集中在影响外植体再生、共培养1．1材料和试剂条件、不定芽的筛选条件等因素上。黄家权等曾对试验所用柠檬种子为尤力克柠檬种子．购自武收稿日期：2014—01—10基金项目：国家自然科学基金面上项目(31071786)；湖北省农业科技创新中心资助项目(2011-620-001-03)作者简介：仝t~(1978一)，男，河南唐河人，副研究员，博士，主要从事果树生物技术及栽培生理研究，(~~)027-88108058(电子信箱)tsa~@163．eom；通讯作者，蒋迎春，