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1、保加利亚尖椒遗传转化体系的建立江苏农业科学2009年第1期一3l一保加利亚尖椒遗传转化体系的建立敬国兴,李伏钦,陈永双,何永敏,曾富华(1.湛江师范学院生命科学与技术学院,广东湛江524048;2.湖南农业大学生物与发酵工程实验室,湖南长沙410128)摘要:以保加利亚尖椒子叶为外植体,通过农杆菌介导法将抗真菌三价载体(GCR)遗传转化至辣椒,建立了适合辣椒转化的高效再生体系,结果表明:在侵染液pH值5.2,预培养2d,侵染时间7～8rain,无AS,共培养2d的条件下,抗性不定芽的诱导分化率达到89%,转基因植株
2、经PCR,Dotblotting检测证明外源基因已整合至辣椒基因组DNA中.关键词i辣椒;GCR;转化;检测中图分类号:$641.303文献标志码:A文章编号:1002—1302(2009)01-0031一o4辣椒是一种重要的蔬菜作物和调料品,各种病害危害导致辣椒产量和品质受到严重影响,利用基因工程技术是改善辣椒产量和品质的重要措施之一….在辣椒转基因中,最常用的是根癌农杆菌介导的叶盘转化法,此法操作简单易行,转化效率较高.影响植物外植体遗传转化的因素很多,如植物的基因型,植物组织的种类和生理状态,农杆菌类型,转化
3、方式,培养条件以及筛选强度等.收稿日期:2008—07一O1基金项目:广东省科技计划项目(编号:Z002A2070402);广东省自然科学基金(编号:5011730).作者简介:敬国兴(1981一),男,湖南常德人,助教,从事分子生物学研究.利用抗真菌蛋白葡聚糖酶(B一1,3一glucanase,Glu.)基因,几丁质酶(Chitinase,Chi.)基因和萝卜抗真菌蛋白(Rs—AFP2)基因构建三价表达载体,这些基因酶解活性及抑菌范围各不相同但又有极强协同作用M,保证转化后植株获得广谱抗病性.本研究以产量较高的常
4、规品种保加利亚尖椒子叶为试验材料,在成熟的再生体系基础上,对农杆菌介导抗真菌三价载体(GCR)转化的影响因子进行了探讨,同时对转基因辣椒进行PCR,Dotingbloaing检测,验证外面基因是否转入辣椒.1材料与方法通讯作者:曾富华,教授,博士生导师.Te1:(0759)3183622;1.1E—mail:zengfuhua@gmail.com.材料保加利亚尖椒(Bulgariapointedpepper)购自内蒙古赤峰(上接第3O页)[5]LussoM,KueJ.Theeffectofsenseandantis
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