野蔷薇再生体系的建立及其遗传转化的研究

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1、华中农业大学硕士学位论文野蔷薇再生体系的建立及其遗传转化的研究姓名：丁萌申请学位级别：硕士专业：园林植物与观赏园艺指导教师：宁国贵201206野蔷薇再生体系的建立及遗传转化的研瓷野蔷薇再生体系的建立及其遗传转化的研究摘要野蔷薇(RosamultifloraThunb．)又名多花蔷薇，是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa)落叶木本植物，具有较高的观赏价值和一定的药用价值。野蔷薇具有繁殖容易、生长快、抗热性强及观赏价值高的特点，既可用作月季砧木，也可用作育种的亲本。但野蔷薇有些性状，如花期短、皮刺多等，不适合用作砧木和亲本，

2、需要利用植物基因工程进行改良。本实验对华中地区四种野蔷薇的再生和遗传转化进行了系统研究。主要的研究结果如下：1．建立了野蔷薇叶片不定芽直接再生体系以四种野蔷薇叶片为外植体，研究了基因型、植物生长调节剂、不同的外植体来源对其直接再生的影响，以筛选出不定芽诱导率最高的株系及最优的诱导条件。研究结果表明：四种野蔷薇的不定芽在1／2MS+0．05mg／LNAA+1．5mejLTDZ+10mg／LAgN03+3％Glucose+0．3％GEL的培养基上的诱导率差异显著，野蔷薇2号为78．20％，3号为61．16％，4号为13．00％，l号

3、仅5．93％；野蔷薇2号的田问叶片外植体的不定芽诱导率高于组培苗叶片；基因型、植物生长调节剂及叶片的状态对野蔷薇的直接再生影响显著。2．建立了野蔷薇体细胞胚发生途径再生体系以四种野蔷薇的叶片为外植体，研究了基因型、添加剂、植物生长调节剂和培养条件对体细胞胚诱导的影响。另外，以野蔷薇2号和野蔷薇4号的体细胞胚为外植体，研究了植物生长调节剂和培养条件对体细胞胚增殖、萌发的影响。以叶片为外植体进行体细胞胚诱导时，4种不同基因型野蔷薇的叶片均有体细胞胚发生。野蔷薇1号和野蔷薇4号在MS+5．0mg／L2,4-D+400mg／LL-p+1

4、0mg／LAgN03+3％Glucose+0．3％GEL的培养基上诱导率最高分别为4．38％、5．01％；野蔷薇2号和野蔷薇3号在MS+4．0mg／L2,4-D+400mg／LL—p+10mg／LAgN03+3％Glucose+0．3％GEL的培养基上诱导率最高分别为4．63％、2．78％。野蔷薇2号体细胞胚在MS+I．0mg／L2，4．D+0．01mg／LBA+3％Glucose+0．3％GEL的培养基上增殖效果最好，增殖系数为4．15。野蔷薇4号在MS+0．5mg／L2,4．D+0．005mg／LBA+3％Glucose+0

5、．3％GEL的培华中农业大学2012届硕士研究生学位论文养基上增殖效果最好，增殖系数为3．55。野蔷薇2号体细胞胚在MS+0．5mg／LBA+1．0mg／LTDZ+3％Glucose+0．3％GEL的萌发培养基上萌发率最高为91．67％，野蔷薇4号MS+0．5mg／LBA+1．0mg／LTDZ+3％Glucose+0．3％GEL的萌发培养基上萌发率最高为83．33％。3．初步建立了野蔷薇的遗传转化体系以体细胞胚为外植体，研究了卡那霉素和潮霉素两种抗生素对野蔷薇2号体细胞胚增殖的影响。结果表明，在含120mg／LKm的培养基上培养

6、一个月，60．18％的体细胞胚褐化死亡；在含80mg／LHyg的培养基上培养一个月，93．30％的体细胞胚褐化死亡。以体细胞胚为外植体，研究了潮霉素对野蔷薇4号体细胞胚增殖的影响，在含70mg／LHyg的培养基上培养一个月，66．76％的体细胞胚褐化死亡。分别以野蔷薇2号、4号体细胞胚作为农杆菌介导遗传转化的受体，设定不同的侵染时间和共培养时间，统计并分析共培养后GUS基因瞬间表达率的结果表明：野蔷薇2号体细胞胚侵染40min，共培养3d，GUS瞬间表达率最高达到65．30％；野蔷薇2号体细胞胚侵染40min，共培养3d，在MS

7、+I．0m．g／L2,4．D+300mg／LCef+50mg／LHyg+3％Glucose+0．3％GEL的选择培养基上培养一个月后，GUS稳定表达的体细胞胚约占6．52％。野蔷薇4号体细胞胚侵染40min，共培养5d，GUS瞬间表达率最高达到69．51％1野蔷薇4号体细胞胚侵染40min，共培养5d；在MS+I．0mg／L2，4一D+300mg／LCef+50mg／LHyg+3％Glucose+0．3％GEL的选择培养基上培养一个月后，GUS稳定表达的体细胞胚约占7．32％。关键词：野蔷薇；小叶片；直接再生；体细胞胚；遗传转化

8、野蔷薇再生体系的建立及遗传转化的研究EstablishmentofdifferentregenerationsystemandgenetictransformationinRosamultifloraAbstractRosamultifloraThunb．，、Ⅳ