Syncytin慢病毒干扰载体及syncytin沉默Jurkat细胞系的建立-论文.pdf

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1、昆明医科大学学报2014，35(8)：1215CN53—1221／RJournalofKunmingMedicalUniversitySyncytin慢病毒干扰载体及syncytin沉默Jurkat细胞系的建立郑志一，牛华，陶瑞，张桂前，范欣∞，高玉红，孙鹭∞(1)昆明理工大学生命科学与技术学院，云南昆明650504；2)昆明理工大学附属昆华医院检验科，云南昆明650032)[摘要]目的构建PGC—LV—syncytin慢病毒载体并建立Syncytin基因表达下调的Jurkat细胞系．方法利用RNA干扰序列软件设计并筛选有效干扰序列，将构建好的Syncytin表达质粒与慢病毒包装质粒

2、共转染至包装细胞293T，包装产生病毒颗粒后感染Jurkat细胞，获得Syncytin稳定沉默的细胞系．荧光显微镜下观察感染效率，分别使用RealtimePCR和AnnexinV—APC单染法结合流式细胞仪检测目的基因表达水平和细胞凋亡率．结果成功构建了具有Syncytin干扰效果的慢病毒载体及其稳定沉默的Jurkat细胞系．结论该细胞系的构建为进一步研究Syncytin基因在白血病的功能提供了细胞模型．[关键词]RNA干扰；慢病毒载体；Syncytin基因；Jurkat细胞系[中图分类号]Q291[文献标识码]A[文章编号]2095-610X(2014)08一o012—04C0ns

3、tructionofLentiviralVectorofSyncytinandEstablishmentofJurkatCellswithSyncytinGeneSilenceZHENGZhi，2)，NIUHua2)，TAORui2]，ZHANGGui—qian2)FANXin，GAOYu—hong2)，SUNYi22)，(1)CollegeofLifeScience，KunmingUniversityofScienceandTechnology，KunmingYunnan650504；2)Dept．ofLaboratoryMedicine，KunhuaHospitalAffilia

4、tedtoKunmingUniversityofScienceandTechnology，KunmingYunnan650032，China)[Abstract]ObjectiveToconstructPGC—LV—syncytinvectorandestablishJurkatcelllinewithsyncytingeneknockdown．MethodsThetargetingsyncytingenesequencewasdesignedbytheRNAisoftware，andwereclonedintothePGC—LVvector．Thepositivecloneswer

5、econfirmedbybothPCRandrestrictionenzymedigestion，finallybyDNAsequencing．ThelentiviruswasthenharvestedandusedtoinfectJurkatcells．TheinfectedefficiencywasindicatedbyGFPanddetectedwithfluorescentmicroscope．TheexpressionlevelofsyncytingeneofJurkatcelllineatmRNAwasdetectedbyReal—TimePCR．andthenAnnex

6、inV—APC—labeledflowcytometrvwasusedtodetectcellapoptosisrates．ResultsAlentiviralvectorwithsyncytingeneinterferencewasconstructed，andaJurkatcelllinestablyexpressingsyncytinshRNAforsyncytinknockdownwassuccessfullyestablished．ConclusionAlentiviralvectorcarryingthetargetinggenesyncytinhasbeensucces

7、sfullyconstructed，andaJurkatcelllinestablyexpressingsyncytinshRNAhasestablishedwiththislentiviralsystem，thecelllinecanbeasacellmodelforfurtherresearchofroleofsyncytininleukemia．1KeywordsjRNAi；Lentiviralvector；Syncflingene；Jurkatce