SIV、PCV-2、PRRSV三重PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、动物医学进展。2013，34(12)：42—45ProgressinVeterinaryMedicineSIV、PCV-2、PRRSV三重PCR检测方法的建立陈胜锋，徐振娜，王丙云卜，计慧琴，陈志胜(1．佛山科学技术学院动物医学系，广东佛山528231；2．东莞市动物疫病预防控制中心，广东东莞523107)摘要：为建立猪流感病毒(SIV)、猪圆环病毒2型(PCV一2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单一或混合感染的快速检测方法，针对病毒保守区设计3对特异性引物用于扩增sIV、PCV一2与PRRsV基因的相应片段，并通过优化反应条件，建立了SIV、PCV一2、PRRSV三重PCR

2、检测方法，其最低检测限度为10～10数量级。用三重PCR和单项PCR／RT-PCR检测40份临床病料，符合率为100。提示建立的三重PCR检测方法能够对sIV、PCV一2、PRRSV单一或混合感染的临床样品进行快速鉴别检测，具有一定的临床应用价值。关键词：猪流感病毒；猪圆环病毒2型；猪繁殖与呼吸综合征病毒；三重PCR中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1007—5038(2013)12—0042—04在当前集约化养殖条件下，猪呼吸系统疾病是单独或混合感染进行早期、快速、准确的鉴别与诊给养猪业带大巨大经济损失的重要病因之一。导致断，同时也对这3种病的流行病学调查提供参考。

3、猪呼吸系统疾病的主要因素有细菌、病毒、寄生虫等1材料与方法传染性因素以及饲养管理、气候变化等非传染性因1．1材料素，其中由胸膜肺炎放线杆菌(Actimobacilluspleu—1．1．1细胞株、毒株及病料Marc一145细胞、PK一ropneumoniae，App)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus15细胞由华南农业大学兽医学院微生物学教研室parasuis，Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamul—惠赠；SIVH1N1株和H3N2株、PRRSV、PCV一2、tocide)等细菌性病原与猪流感病毒(Swineinfluen—猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(P

4、RV)、猪细小zavirus，SIV)、猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvi—病毒(PPV)等病毒株均由佛山科学技术学院预防兽rus，PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinere～医重点实验室保存；40份病料采集自广东某些发病productiveandrespiratorysyndromevirus，猪场。PRRSV)、猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype1．1．2主要试剂MiniBESTViralRNA／DNA2，PCV一2)等病毒性病原单独或混合感染引起的呼ExtractionKit、AMV反转录酶、RNA酶抑制剂、随吸道疾病在临床中最为常见

5、n]。由于这些疾病有机引物、ExTaq酶、dNTPs(2．5mmol／L、类似的临床症状(咳嗽、喘气、打喷嚏等)，往往被混10mmol／L)、DNAMarkersDL500、琼脂糖等为宝淆而不能及时、准确地予以鉴别和诊断。生物工程(大连)有限公司产品；其他试剂均为分析PCR技术具有快速、特异和灵敏等特点，在畜纯。禽传染性疾病的鉴别与诊断中已得到广泛应用]。目前，虽已报道多个引起呼吸道疾病的细菌性[4或1．2方法病毒性病原。。’的单项或多重PCR检测方法，但尚1．2．1引物设计参照GenBank公布的SIV、未见同时检测SIV、PCV一2、PRRSV的多重PCR检PRRSV、PCV一2

6、多个毒株的基因序列，在保守区设测方法的报道。而在生产实践中，这3种病原的混计如下3对特异性引物：SIV(GenBank序列号：合感染越来越普遍¨1“]。因此，本研究针对引起呼KF550963．1)上游引物：TTCCAGGTTTCTATG—吸道疾病的这3种重要病原的保守序列，设计特异GCTGAGTA，下游引物：AAAAGACGAT—性引物并优化反应条件，建立了多重PCR检测方CAAGAATCCACAA，扩增M基因297bp片段；法，为SIV、PCV一2、PRRSV这3种猪的重要病原体PRRSV(GenBank序列号：U64928．1)上游引物：收稿日期：2013-07—01基金项目：佛

7、山市科技专项发展基金项目(2009030)；广东省佛山市禅城区科技开发专项资金项目(2011A1063)作者简介：陈胜锋(1977一)，男，湖北孝感人，副教授，博士，主要从事基础兽医学研究。*通讯作者陈胜锋等：SIV、PCV一2、PRRSV三重PCR检测方法的建立43ATTACCTACACGCCAGTGATGAT，下游引物：上述建立的PCR反应条件进行单项和三重PCR扩TTCCAGGTTTCTATGGCTGAGTA，扩增M基增，检测建立方法的敏感性，并用同