ppv、prv和pcv-2三重pcr与pcv-2 lamp检测方法的建立及初步应用

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1、ESTABLISHMENTANDPRI酬瞄删APPLICATIoNoFTIUPLEXPCRASSAYFoRDETECTIoNoFPPVPRVANDPCV．一2ANDTHELAMPMETHODFoRDETECTIoNoFPCV，-2ShenShichuanAThesisSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheMasterDegreeofAgronomySupervisedByProf．WangYichengandJiangPingColl

2、egeofVeterinaryMedicineNanjingAgriculturalUniversityNanjing210095，P．R．ChinaCompletedinJune2012CommencementinJune2012原创性声明舢㈣Ⅷ圳㈣删舢舢洲删Y2360656本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者

3、(需亲笔)签名：洌湃∥月7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密函／(请在以上方框内打“√”)学位论文作者(需亲笔)签名：杪¨7导师(需亲笔)签名：劲阵∥月J7日细，≯年j6其7日浙江省重大科技专项农业项目(计划编号：2008C12049)资助项目This

4、workwassupportedbytheMajorScience&TechnologyProjectsofZhejiangProvince(GrandNo．2008C12049)目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．III符号及缩略语说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯V第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．1猪病常用核酸诊断技术简介⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯■⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1．1聚合酶链反应技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．1．2实时荧光定量PCR技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21．1．3环介导等温扩增技术⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．2猪主要DNA病毒及其实验室检测方法简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．2．1猪细小病毒简介与实验室检测方法研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．2．2猪伪狂犬病毒简介与实验室检测方法研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61．2．3猪圆环病毒2型简介与实验室检测方法研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8

6、1．3研究的目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第二章PPV、PRV及PCV-2单项及三重二温式PCR检测方法的建立和初步应用⋯112．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112．1．1病毒、菌株和载体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1．2主要仪器与试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1．3引物设计与合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．1．4核酸的提取及目的DNA片段的克隆和测序⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．132．1．5PPV、

7、PRV和PCV-2单项二温式PCR方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．152．1．6PPV、PRV和PCV-2三重二温式PCR反应体系及反应条件的优化⋯⋯．152．1．7三重二温式PCR反应敏感性试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．1．8三重二温式PCR反应特异性试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．1．9三重二温式PCR的重复性试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．1．10单项及三重二温式PCR方法临床病料验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．2结果⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172

8、．2．1PPV、PRV和PCV-2目的