正交试验优化羊肌腱中Ⅰ型胶原蛋白提取工艺.pdf

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1、82014,Vo1．28,No．Ol肉类研究加工工艺MEATRESEARCH正交试验优化羊肌腱中I型胶原蛋白提取工艺王月宏，莎丽娜(内蒙古农业大学食品科学与工程学院，内蒙古呼和浩特010018)摘要：以羊肌腱为实验材料，经脱脂、脱钙、除杂蛋白后，用盐酸胍去除蛋白多糖，经胃蛋白酶酶解、氯化钠盐析、透析后对其进行提取工艺的研究与鉴定。结果表明，单因素试验及正交试验确定最佳工艺条件为酶解时间60h、酶添加量4％、0．1mol／L柠檬酸溶液添加量5mL／g进行羊肌腱提取。紫外光谱分析结果显示：所提胶原最大吸收峰220nm，证明提

2、取物为胶原蛋白。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明：羊肌腱中存在的蛋白主要是I型胶原蛋白。经红外光谱分析，进一步证明提取的胶原蛋白为I型胶原蛋白且结构完整。关键词：I型胶原蛋白；提取工艺；鉴定ExtractionofTypeICollagenfromSheepTendonWANGYue-hong．SHALi—na：{=(CollegeofFoodScienceandEngineering，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010018，China)Abstract

3、：TypeIcollagenfromsheeptendonwaspreparedbythefollowingsequentialsteps：degreasmganddecalcificationofthestartingrawmaterial，removalofimpurityproteins，removalofproteoglycansbyextractionwithguanidiniumhydrochloride，pepsin—catalyzedhydrolysis，saltingoutwithsodiumchlor

4、ideanddialysis．Theoptimalconditionsforenzymatichydrolysisweredeterminedbysingle—factorexperimentsando~hogonalarraydesignexperimentashydrolysisatanenzymeconcentrationof4％for60hin0．1mol／Lcitricacidwithasolventtosubstrateratioof5：lmug．UVspectralanalysisoftheresultan

5、textractshowedmaximumabsorptionatapproximately220nm，confirmingittobecollagen．TheproteincompositionofsheeptendonwasdominatedbytypeIcollagen．asdemonstratedbySDS—PAGEanalysis．TheextractwasfurtherconfirmedbyinfraredspectralanalysistobetypeIcollagenwithintactstructure

6、．Keywords：typeIcollagen；extractionprocess；identification中图分类号：TS251文献标志码：A文章编号：1001—8123(2014)01—0008—04胶原fcollagen)是由动物细胞合成的一种生物高分原料进行胶原蛋白的提取，并研究不同酶质量分数、酶子，具有保护机体功能的作用。动物的键、角、韧带、解时间以及柠檬酸添加量对羊肌腱中胶原蛋白得率的影骨、血管等，主要成分都是胶原，在生物体内起着重要响，为羊肌腱高效利用提供一定的理论依据。的作用。胶原蛋白资源丰富并含有丰

7、富的氨基酸，口感柔和、易于消化，被用在许多保健性食品和营养性食品1材料与方法中。。胶原经过适当处理具有良好的生物降解性、生物可吸收性和生物相容性】，因此，可成为一种理想的生物1．1材料与试剂新材料以期应用于组织的修复和器官重建研究中。I型羊肌腱市售。胶原蛋白呈组织特异性分布，存在于多种结缔组织中，胃蛋白酶(1：10000)、标准I型胶原蛋白美国属于成纤维胶原。目前，至少有19种不同类型的胶原Sigma公司；盐酸胍美国Amresco公司；MD34透析袋被发现通过单克隆抗体及基因工程技术已发现了，最常(800014000ku

8、)北京Solarbio公司；氯仿、甲醇、见的是I、II、III型胶原，其中I型胶原占总胶原80％柠檬酸、乙酸、氯化钠均为分析纯。以上，含量最高。目前，关于胶原蛋白提取工艺的研1．2仪器与设备究报道很多一，为了提高原料利用，本实验以羊肌腱为LGJ一25C压盖型冷冻干燥机北京四环科学仪器厂收稿日期：2013—12—10基