胃癌中p16基因甲基化及其与胃癌临床病理特征的关系.doc

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1、胃癌中pl6基因甲基化及其与胃癌临床病理特征的关系摘要：目的：检测胃癌(GC)pl6基因的启动子CpG岛甲基化状态，探讨"6基因甲基化在胃癌发生发展中的作用及其与胃癌临床病理特征的关系。方法：应用甲基化特异性PCR(MSP)检测胃癌组织和正常胃粘膜组织pl6基因的启动子CpG岛的甲基化状态。并对胃癌中pl6基因的甲基化与临床病理特征之间的关系进行分析。结果：胃癌组织中口6基因的甲基化阳性率为56.8%,对照正常组织组中未发现pl6基因甲基化，胃癌组P16基因甲基化阳性率显著高于对照组。且甲基化表达与GC患者的年龄、性别、肿瘤大小、部位及组织学类型无关，与病变的浸润深

2、度、淋巴结转移和远处转移有关。结论：P16基因甲基化修饰在GC发生发展中起重要作用，可作为反映胃癌侵袭转移的生物学指标。关键词：pl6；遗传学；甲基化；胃癌中图分类号:R735.2文献标识码：A文章编号:1008-2409(2011)03-0254-04研究发现胃癌的发生发展是一个复杂的多阶段过程，胃癌和其他肿瘤一样是多基因病，是多种相关基因发生失常的结果。最近研究表明：P16基因是个候选肿瘤抑制基因，其基冈改变、转录异常和表达丢失与肿瘤的发生发展存在着密切的关系。遗传学的研究表明，胃癌的形成常常伴随着抑癌基因肩动子区域CpG岛的异常甲基化修饰。本研究采用甲基化特异

3、性聚合酶链反应(MSP)检测了pl6基因启动了区在胃癌组织中的甲基化状况，现分析如下。1对象与方法对象选择2006年1月至2009年10月在我院腔镜中心胃镜检查并经手术及病理证实为GC的患者74例，男46例，女28例；年龄36〜87岁，平均58.5岁；高分化胃癌18例，中分化胃癌21例，低分化胃癌35例；肿瘤直径小于5cm53例，大于5cm21例；部位：贲门胃底11例，胃体26例，胃窦37例；所有病例取材前均未进行抗肿瘤治疗，所有患者均取病变组织和正常胃粘膜组织各1份，样本离体后30min内均迅速放置于一80°C冰箱中。临床病理学分期采用国际抗癌联盟1997修订的T

4、NM分期标准，其中I期19例，II期13例，III期20例，IV期22例。1.2方法1.2.1基因组DNA提取参照大连TaKaRa公司试剂盒说明书进行，提取产物用美国Bio-Rad公司SmartSpeeplus核酸测定仪检测DNA的浓度和纯度，如］OD260/OD280在1.6〜1.8之间则置于-20°C的冰箱备用。1.2.2亚硫酸氢盐修饰参照美国Epigentek公司产品说明书进行。1.2.3PCR将己修饰的DNA,分别用甲基化特异性引物和非甲基化特异性引物进行PCR,pl6基冈引物设讣参照文献。PCR反应体系的构成：Taq酶0.5u

5、,模板DNA2.5ng,上游

6、引物(20umol/L)lu

7、,下游引物(20umol/L)lu

8、,GCBufferI25u

9、,dNTP(含Mg2+)8ul,灭菌蒸憾水加至50vI,引物和扩增参数见表1。PCR产物行4%琼脂糖电泳(80V,lOOmin),结果经美国Bio-Rad公司GelDoeTMXR凝胶成像系统进行分析，详见表1。1.3统计学分析应用统计分析软件SPSS13.0进行x2检验或者Fisher精确检验，判定标准：P0.05),与病变的浸润程度、淋巴结转移和远处转移有关(P0.05),与病变的浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关(P