利用简化的SDS法提取杨树基因组DNA.pdf

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1、第2l卷第4期河北林果研究Voi.2lNo.42006年l2月HEBEIJOURNALOFFORESTRYANDORCHARDRESEARCHDec.2006!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!文章编号：l007-496l（2006）04-0363-04利用简化的SDS法提取杨树基因组DNAll2l郝会海，李燕玲，杜志军，杜克久（l河北农业大学林学院，河北保定07l000；2河北省邯郸县农牧局，河北邯郸05600l）摘要：以杨树组培苗幼嫩叶片为材料，在室温下采用

2、简化的SDS法快速制备其基因组DNA，并对制备DNA过程中的影响因子进行了初步研究。结果表明，采用此方法制备的基因组DNA在数量和纯度上可以满足聚合酶链式反应（PCR）的要求。另外，DNA提取缓冲液中添加一定浓度的PVP、!-巯基乙醇，有利于DNA提取。关键词：基因组DNA；DNA制备；DNA纯度中图分类号：O37；S792.ll文献标识码：AAguickmethodofextractingpoplargenomicDNAll2lHAOHui-hai，LIYan-ling，DUZhi-jun，DUKe-jiu（lCollegeofForestry，Agric

3、ulturalUniuersityofHebei，Baoding07l000，China；2AgricultureandPasturageBureauofHandanCounty，Handan05600l，China）Abstract：ArapidandsimpiemethodforextractionofpopiargenomicDNAatroomtemperaturewasstudiedinthispaper.Thefactorswhichinfiuencingtheprocesswereaisostudied.Theresuitsshowthat，th

4、eDNAisenoughtomeetthesubseguentuseinguaiityandpurity.It’susefuitoaddsomePVP，!-Mercaptoethanoiinextractionbuffer.Keywords：genomicDNA；DNAisoiation；purityofDNA随着转基因技术在植物品种改良中的广泛运l材料与方法用，快速制备植物DNA的方法变得越来越重要。它不仅可以帮助在DNA水平上大规模快速鉴定进行了l.l材料遗传操作的植物个体及其后代，也为研究植物群体在l.l.l供试植物材料本研究小组获得的转Bt-单株水平

5、的遗传多样性提供了条件。目前已经在植CrylAc基因的毛白杨雄株组培苗，选取顶端新生叶［l］［2，3］物中建立了多种DNA提取方法，如CTAB法、片。［4，5］［6］SDS法及高盐低pH法等。通过这些方法已成l.l.2仪器及试剂台式冷冻离心机Centri-功地提纯了许多植物的DNA。但这些方法仍然存在fuge58l0R（Appendorf公司），移液器（Appendorf公司），一定的缺陷：提取步骤较多；苯酚具有相当毒性；成本PCR仪（Ampgene4800），凝胶成像系统EagieEyeIISys-比较高。tem（美国STRAgENE公司），光谱仪（UV-

6、vis8500），在保证质量的前提下，为了进一步简化试验流DYY-"型琼脂糖凝胶电泳仪（北京六一厂）。dNTPs，［8］程、降低试验成本，在Edwards等人研究基础上，以DNA聚合酶（宝生物工程有限公司），引物合成（宝生转基因杨树组培苗叶片为材料进行了杨树基因组物公司）其他试剂均为市售分析纯。DNA的提取研究，初步建立了适合杨树基因组DNA2.l试验方法的快速提取方法。这一方法的建立对快速检测转基l.2.l参照Edwards等人SDS法提取植株基因组因杨树外源基因有重要的实际应用价值。DNA收稿日期：2006-04-l0；修改稿收期：2006-06-ll基

7、金项目：河北省林业局资助项目（No.02072l6），河北省教育厅资助项目（B2002209）。作者简介：郝会海（l980-），男，河北邯郸人，河北农业大学在读硕士研究生。通讯作者：杜克久（l956-），男，教授，博导，研究方向：林木生物技术，E-maii：dukejiu@yahoo.com.cn。河北林果研究第21卷364（1）用1.5mL离心管取一叶盘，研磨成匀浆。大小为0.75kb左右。（2）加入500的0.5SDS提取液，涡旋5sec。反应条件为：反应总体积为25，其中4HLHLHL（3）12000r/m离心3min，取上清液转入新管。10xbuff

8、er，1.25mmOIdNTPs，10pmOI引物，